| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语 | 第12-14页 |
| 第1章 综述 | 第14-26页 |
| ·链霉菌概述 | 第14-15页 |
| ·链霉菌基本生长特征 | 第14-15页 |
| ·链霉菌的次级代谢产物 | 第15页 |
| ·环脂肽类抗生素—达托霉素 | 第15-20页 |
| ·达托霉素的发现 | 第15-16页 |
| ·达托霉素的理化性质 | 第16页 |
| ·达托霉素的抗菌机理 | 第16-17页 |
| ·达托霉素的临床研究与应用 | 第17-18页 |
| ·达托霉素的生物合成 | 第18-20页 |
| ·S.roseosporus产达托霉素研究现状 | 第20-23页 |
| ·提高达托霉素产量 | 第20-21页 |
| ·寻找达托霉素结构类型物 | 第21-23页 |
| ·犬尿氨酸途径 | 第23-26页 |
| ·犬尿氨酸途径概述 | 第23-24页 |
| ·犬尿氨酸途径产物的生物学功能 | 第24-26页 |
| 第2章 前言 | 第26-28页 |
| 第3章 实验材料与方法 | 第28-44页 |
| ·实验材料 | 第28-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·常用抗生素 | 第30页 |
| ·实验试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-44页 |
| ·大肠杆菌的培养以及菌种保藏 | 第33页 |
| ·大肠杆菌质粒的常规提取 | 第33页 |
| ·大肠杆菌质粒的快速提取和鉴定 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第34-35页 |
| ·DNA酶切反应 | 第35页 |
| ·质粒与DNA片段的连接反应 | 第35页 |
| ·S.roseosporus的培养及孢子悬液的制备 | 第35-36页 |
| ·接合转移 | 第36页 |
| ·S.roseosporus DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·PCR | 第37-39页 |
| ·S.roseosporus培养液的收集 | 第39页 |
| ·生物活性检测以及产物定量 | 第39-40页 |
| ·蛋白质体外诱导表达 | 第40页 |
| ·蛋白质纯化和浓缩 | 第40-41页 |
| ·蛋白质定量 | 第41页 |
| ·重组蛋白KYN的酶活检测 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第41-42页 |
| ·序列分析以及数据分析 | 第42-44页 |
| 第4章 实验结果与分析 | 第44-64页 |
| ·S.roseosporus遗传转化系统的建立 | 第44-46页 |
| ·接合转移条件的优化 | 第44页 |
| ·遗传转化方法的建立 | 第44-46页 |
| ·S.roseosporus中犬尿氨酸途径基因的克隆和分析 | 第46-51页 |
| ·色氨酸2,3-加氧酶基因(tdo)的克隆和分析 | 第46-47页 |
| ·犬尿氨酸甲酰胺酶基因(kynf)的克隆和分析 | 第47-48页 |
| ·犬尿氨酸酶基因(kyn)的克隆和分析 | 第48-49页 |
| ·S.roseosporus中犬尿氨酸途径的确定 | 第49-51页 |
| ·载体构建以及重组菌株的筛选 | 第51-60页 |
| ·tdo敲除载体和tdo过表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·tdo敲除突变株和tdo过表达菌株的筛选 | 第52-54页 |
| ·tdo遗传回补株的获得 | 第54页 |
| ·重组蛋白KYN的体外表达与酶活检测 | 第54-55页 |
| ·kyn敲除载体的构建 | 第55-56页 |
| ·kyn敲除突变株的筛选 | 第56-57页 |
| ·dptJ敲除载体和dptJ过表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·dptJ敲除突变株和dptJ过表达菌株的筛选 | 第58-59页 |
| ·dptJ遗传互补株的获得 | 第59-60页 |
| ·犬尿氨酸途径对达托霉素生物合成的影响 | 第60-61页 |
| ·tdo基因敲除对达托霉素生物合成的影响 | 第60页 |
| ·tdo基因过表达对达托霉素生物合成的影响 | 第60-61页 |
| ·kyn基因敲除对达托霉素生物合成的影响 | 第61页 |
| ·dptJ基因敲除和过表达对达托霉素生物合成的影响 | 第61-64页 |
| ·dptJ基因敲除对达托霉素生物合成的影响 | 第61-62页 |
| ·dptJ基因过表达对达托霉素生物合成的影响 | 第62-64页 |
| 第5章 讨论 | 第64-68页 |
| ·S.roseosporus中犬尿氨酸途径的确定 | 第64页 |
| ·犬尿氨酸途径对达托霉素生物合成的影响 | 第64-68页 |
| 第6章 总结 | 第68-70页 |
| ·总结 | 第68页 |
| ·创新点 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 硕士期间发表论文和奖励情况 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
