| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| ·肿瘤疫苗的研究概况 | 第10-11页 |
| ·肿瘤疫苗的新进展 | 第11-14页 |
| ·肿瘤细胞疫苗 | 第11-12页 |
| ·蛋白和肽疫苗 | 第12页 |
| ·重组病毒或者细菌疫苗 | 第12-13页 |
| ·抗原加树突状细胞 | 第13页 |
| ·质粒DNA 疫苗 | 第13-14页 |
| ·本文的研究内容和意义 | 第14-17页 |
| 第二章 小鼠乳腺癌细胞EMT-6 转基因细胞系的建立 | 第17-47页 |
| ·pIRESneo-survivin 和pIRESneo-hCGβ真核表达质粒的构建 | 第17-34页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·载体和菌株 | 第17页 |
| ·工具酶与抗体 | 第17页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-25页 |
| ·Survivin 和hCGβ基因的合成及克隆 | 第18-21页 |
| ·Survivin 和hCGβ重组测序载体的构建与鉴定 | 第21-23页 |
| ·pIRESneo-Survivin 和pIRESneo-hCGβ的构建及鉴定 | 第23-25页 |
| ·结果 | 第25-33页 |
| ·Survivin（NM_001012271）基因和氨基酸序列 | 第25页 |
| ·hCGβ（NM_000737）基因和氨基酸序列 | 第25-26页 |
| ·分步PCR 合成基因 | 第26-27页 |
| ·pGEM-T Easy-Survivin 和pGEM-T Easy-hCGβ重组克隆载体的构建与鉴定 | 第27-32页 |
| ·真核表达质粒pIRESneo-Survivin 和pIRESneo-hCGβ的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·Survivin、hCGβ转基因EMT-6 细胞的建立 | 第34-47页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·载体、菌株及细胞 | 第34页 |
| ·工具酶与抗体 | 第34页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·重组质粒体外瞬时转染的检测 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pIRESneo-Survivin 和pIRESneo-hCGβ转基因细胞系的建立 | 第36-40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·转染质粒的准备 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pIRESneo-Survivin、pIRESneo-hCGβ的真核表达 | 第41-42页 |
| ·转基因细胞系的稳定建立 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 pVAX1- hmCTP37-Fc-GPI-IRES-GM/B7 基因疫苗的构建及真核表达 | 第47-60页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·载体、菌株及细胞 | 第47页 |
| ·工具酶与抗体 | 第47-48页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·肿瘤复合抗原hmCTP37 基因 | 第48-49页 |
| ·抗原hmCTP37 基因的设计 | 第48-49页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·抗原hmCTP37 基因的扩增 | 第49页 |
| ·hmCTP37-T 重组克隆载体的构建与鉴定 | 第49-50页 |
| ·PCR 产物与pGEM-T Easy 载体的连接 | 第49页 |
| ·连接子转化大肠杆菌感受态细胞DH5α | 第49-50页 |
| ·hmCTP37-T 重组质粒的筛选与PCR 鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒pCI-hm CTP37-Fc-GPI 的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| ·片段hmCTP37 和真核表达载体pCI-Fc-GPI 的双酶切及回收 | 第50页 |
| ·hmCTP37、pCI-Fc-GPI 的连接、转化及阳性克隆的鉴定 | 第50-51页 |
| ·基因疫苗pVAX1-hmCTP37-Fc-GPI-IRES 的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒pCI-hm CTP37-Fc-GPI 的酶切、粘端补平及回收 | 第51-52页 |
| ·真核表达载体pVAX1-IRES 的酶切及回收 | 第52页 |
| ·hmCTP37-Fc-GPI 和pVAX1-IRES 的连接、转化及阳性克隆的鉴定 | 第52页 |
| ·重组质粒pVAX1-hmCTP37-Fc-GPI-IRES-GM/B7 的构建及鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pVAX1-hmCTP37-Fc-GPI 和载体pVAX1-IRES-GM/B7 的双酶切及回收 | 第52-53页 |
| ·hmCTP37-Fc-GPI 和pVAX1-IRES-GM/B7 的连接、转化及阳性克隆的鉴定 | 第53页 |
| ·重组质粒pVAX1-hmCTP37-Fc-GPI-IRES-GM/B7 的真核表达 | 第53-54页 |
| ·转染细胞用质粒的提取 | 第53页 |
| ·重组质粒瞬时转染293T 细胞 | 第53-54页 |
| ·瞬时转染细胞的流式细胞仪检测 | 第54页 |
| ·瞬时转染细胞的免疫荧光检测 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·抗原hmCTP 的设计 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pCI-hm CTP37-Fc-GPI 的构建及鉴定 | 第55页 |
| ·基因疫苗pVAX1-hmCTP37 -Fc-GPI 的构建及鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组质粒pVAX1-hmCTP37-Fc-GPI-IRES-GM/B7 的构建及鉴定 | 第56页 |
| ·重组质粒pVAX1-hmCTP37-Fc-GPI-IRES-GM/B7 的真核表达 | 第56-58页 |
| ·瞬时转染细胞的流式细胞仪检测 | 第56-57页 |
| ·免疫荧光检测 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
