秦艽AtNHX1基因转化及O-甲基转移酶基因克隆
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-18页 |
| 1 秦艽离体再生的研究 | 第10-11页 |
| 2 抗盐基因遗传转化的研究 | 第11-14页 |
| ·植物遗传转化的方法 | 第11-13页 |
| ·基因枪法 | 第11-12页 |
| ·PEG法 | 第12页 |
| ·电击法 | 第12页 |
| ·花粉管通道法 | 第12-13页 |
| ·农杆菌介导法 | 第13页 |
| ·植物抗盐基因工程 | 第13-14页 |
| 3 O-甲基转移酶基因的研究 | 第14-18页 |
| 第二章 秦艽离体再生的研究 | 第18-30页 |
| 1 材料和方法 | 第18-20页 |
| ·离体再生 | 第18页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·无菌苗的培养 | 第18页 |
| ·胚性愈伤组织的诱导 | 第18页 |
| ·愈伤组织的继代 | 第18页 |
| ·愈伤组织的分化 | 第18页 |
| ·组织学观察 | 第18-19页 |
| ·植化分析 | 第19-20页 |
| ·植物材料 | 第19-20页 |
| ·龙胆苦苷的提取 | 第20页 |
| ·高效液相色谱分析 | 第20页 |
| ·龙胆苦苷标准曲线的绘制 | 第20页 |
| ·体细胞胚发育过程中龙胆苦苷含量的测定 | 第20页 |
| ·数据统计 | 第20页 |
| 2 结果 | 第20-26页 |
| ·离体再生 | 第20-23页 |
| ·胚性愈伤组织的诱导 | 第20-21页 |
| ·愈伤组织的分化 | 第21-23页 |
| ·组织学观察 | 第23-24页 |
| ·体细胞胚发生过程中龙胆苦苷的合成变化 | 第24-26页 |
| 3 讨论 | 第26-30页 |
| ·秦艽体细胞胚的发生 | 第26-27页 |
| ·组织学观察 | 第27-28页 |
| ·秦艽体细胞胚发育过程中龙胆苦苷合成的变化 | 第28-30页 |
| 第三章 农杆菌介导的AtNHX1基因转化秦艽 | 第30-45页 |
| 1 材料和方法 | 第30-37页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第30页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA提取 | 第31-32页 |
| ·PCR检测 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR检测 | 第33-34页 |
| ·总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34页 |
| ·实时定量PCR分析 | 第34-36页 |
| ·总RNA提取 | 第34页 |
| ·DNase处理 | 第34-35页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第35-36页 |
| ·实时定量PCR | 第36页 |
| ·生理生化指标的测定 | 第36-37页 |
| ·相对含水量的测定 | 第37页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第37页 |
| ·可溶性糖和丙二醛(MDA)含量的测定 | 第37页 |
| ·数据统计 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-44页 |
| ·卡那霉素梯度筛选 | 第38页 |
| ·PCR结果 | 第38-40页 |
| ·AtNHX1基因PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR结果 | 第39页 |
| ·实时定量PCR | 第39-40页 |
| ·生理生化指标测定结果 | 第40-44页 |
| ·表型变化 | 第40页 |
| ·相对含水量测定结果 | 第40-41页 |
| ·脯氨酸测定结果 | 第41-42页 |
| ·可溶性糖测定结果 | 第42-43页 |
| ·丙二醛测定结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 秦艽O-甲基转移酶基因片段的分离 | 第45-54页 |
| 1 材料和方法 | 第45-49页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·总RNA提取 | 第45页 |
| ·mRNA纯化 | 第45页 |
| ·3'-RACE | 第45-47页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第46页 |
| ·巢式PCR | 第46-47页 |
| ·PCR产物的回收 | 第47-48页 |
| ·回收产物的连接 | 第48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第49页 |
| ·重组质粒的提取 | 第49页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·DNA序列测定 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-52页 |
| ·3'-RACE反应结果 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·3'-RACE的序列分析 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
