| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·脂肪酶概述 | 第11-14页 |
| ·脂肪酶简介 | 第11-12页 |
| ·脂肪酶的理化性质 | 第12页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第13-14页 |
| ·根霉脂肪酶的研究 | 第14-17页 |
| ·微生物脂肪酶研究概况 | 第14-15页 |
| ·根霉脂肪酶研究概况 | 第15-16页 |
| ·根霉脂肪酶的表达研究 | 第16-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第17-23页 |
| ·枯草杆菌表达系统优缺点 | 第17-18页 |
| ·枯草杆菌表达系统的分类 | 第18-19页 |
| ·蛋白酶缺陷型枯草杆菌作宿主提高表达产物稳定性 | 第19-20页 |
| ·宿主密码子对外源基因表达的影响 | 第20页 |
| ·枯草杆菌工程菌的培养和发酵方法研究 | 第20-22页 |
| ·枯草杆菌表达载体 | 第22-23页 |
| ·本课题的研究目的及思路 | 第23-25页 |
| 第二章 少根根霉脂肪酶基因ral的克隆 | 第25-39页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料和方法 | 第25-27页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·培养方法 | 第27页 |
| ·少根根霉基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·聚合酶链式反应扩增少根根霉脂肪酶成熟肽基因ral | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定和分离基因ral | 第28-29页 |
| ·质粒pMD 18-T-ral的构建 | 第29-30页 |
| ·质粒pMD 18-T-ral转化大肠杆菌 | 第30页 |
| ·质粒pMD 18-T-ral的鉴定 | 第30-31页 |
| ·结果和讨论 | 第31-38页 |
| ·少根根霉基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·聚合酶链式反应扩增基因ral | 第32页 |
| ·质粒pMD 18-T-ral的鉴定 | 第32-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章 基因ral在枯草芽孢杆菌中的组成型表达 | 第39-65页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·试剂和仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-49页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第40-41页 |
| ·枯草启动子(P43)和nprB信号肽基因(SP)以及ral基因的扩增 | 第41页 |
| ·P43-SP-ral基因表达盒的构建 | 第41-44页 |
| ·枯草芽孢杆菌组成型分泌表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pGJ103-P43-SP-ral的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pGJ103-P43-SP-ral的电击转化枯草芽孢杆菌 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pGJ103-P43-SP-ral在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第47-49页 |
| ·结果和讨论 | 第49-63页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第49-50页 |
| ·枯草启动子(P43)和nprB信号肽基因(SP)的扩增 | 第50页 |
| ·P43-SP-ral基因表达盒的构建 | 第50-51页 |
| ·枯草芽孢杆菌组成型分泌表达载体的构建 | 第51-54页 |
| ·重组质粒pGJ103-P43-SP-ral的鉴定 | 第54-55页 |
| ·枯草芽孢杆菌中重组质粒pGJ103-P43-SP-ral的表达和鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组质粒pGJ103-P43-SP-ral在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第56-63页 |
| ·小结 | 第63-65页 |
| 第四章 结论 | 第65-67页 |
| 第五章 问题与建议 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录一 试剂 | 第75-77页 |
| 附录二 仪器设备 | 第77-78页 |
| 附录三 常用实验操作方法 | 第78-83页 |
| 1.琼脂糖凝胶电泳 | 第78页 |
| 2.从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第78-79页 |
| 3.大肠杆菌感受态细胞的制作步骤 | 第79页 |
| 4.乙醇沉淀法回收连接产物 | 第79-80页 |
| 5.电转化 | 第80页 |
| 6.质粒快速提取试剂盒操作步骤如 | 第80-81页 |
| 7.聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 作者和导师简介 | 第85-86页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第86-87页 |
