| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| ·HCMV的研究背景 | 第9-12页 |
| ·HCMV的病毒体结构 | 第10页 |
| ·HCMV的复制过程 | 第10-11页 |
| ·HCMV感染致病机理 | 第11-12页 |
| ·UL49基因的研究现状 | 第12-13页 |
| ·病毒载体 | 第13-14页 |
| ·课题意义 | 第14-15页 |
| 2 实验仪器与材料 | 第15-20页 |
| ·仪器 | 第15-16页 |
| ·材料及试剂 | 第16-17页 |
| ·主要溶液配方 | 第17-20页 |
| 3 实验方法 | 第20-37页 |
| ·DH5α高效感受态的制备 | 第20页 |
| ·质粒的转化 | 第20-21页 |
| ·质粒的提取 | 第21页 |
| ·转化质粒的鉴定 | 第21-23页 |
| ·根据目的基因和质粒载体多克隆酶切位点设计酶切方法,进行酶切鉴定 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| ·用DNA凝胶回收试剂盒回收酶切产物或PCR产物 | 第22-23页 |
| ·pDC316-UL49-GFP和pDC316-GFP重组子的构建 | 第23-26页 |
| ·pDC316-UL49-GFP的构建 | 第23-25页 |
| ·pDC316-GFP的构建 | 第25-26页 |
| ·UL49-GFP基因和GFP基因腺病毒载体重组策略 | 第26-27页 |
| ·293细胞培养 | 第27页 |
| ·位点特异性重组构建Ad-UL49-GFP和Ad-GFP腺病毒及其鉴定 | 第27-29页 |
| ·脂质体2000介导pDC316-UL49-GFP和pBHGloxdeltaE1,3Cre共转染293细胞 | 第27-28页 |
| ·脂质体介导pDC316-GFP和pBHGloxdeltaE1,3Cre共转染293细胞 | 第28页 |
| ·重组腺病毒Ad-UL49-GFP和Ad-GFP的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组腺病毒Ad-UL49-GFP和Ad-GFP的扩增 | 第29-30页 |
| ·重组腺病毒的纯化 | 第30页 |
| ·腺病毒的滴度测定 | 第30-31页 |
| ·重组腺病毒Ad-UL49-GFP及Ad-GFP在小鼠各个组织中的表达测定 | 第31-37页 |
| ·荧光定量PCR | 第31-35页 |
| ·Western blot | 第35-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-47页 |
| ·腺病毒穿梭质粒载体的构建 | 第37-39页 |
| ·pDC316质粒酶切鉴定 | 第37页 |
| ·pDC316-UL49-GFP、pDC316-GFP的鉴定 | 第37-39页 |
| ·腺病毒载体位置特异性重组 | 第39-43页 |
| ·脂质体介导腺病毒穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染293细胞包装成腺病毒 | 第39-41页 |
| ·重组腺病毒的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组腺病毒的扩增、纯化和滴度测定 | 第42-43页 |
| ·Ad-UL49-GFP在小鼠各个组织中的表达 | 第43-47页 |
| ·荧光定量PCR检测UL49-GFP mRNA的表达情况 | 第43-45页 |
| ·Western blot检测UL49-GFP蛋白的表达情况 | 第45-47页 |
| 5 讨论 | 第47-50页 |
| ·动物模型 | 第47-48页 |
| ·病毒载体的选择 | 第48页 |
| ·Ad-UL49-GFP和Ad-GFP的构建、鉴定和纯化 | 第48-50页 |
| 6 小结 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录(Appendix) | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
