| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 主要缩略语 | 第16-17页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 第一章 Numb基因在胆汁淤积性肝纤维化的作用 | 第19-51页 |
| 第一节 建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC~(Numb-KD)和BMSC~(Numb-OE))模型 | 第19-32页 |
| 1 材料 | 第19-24页 |
| 1.1 实验动物 | 第19页 |
| 1.2 实验试剂 | 第19页 |
| 1.3 主要溶剂制备 | 第19-21页 |
| 1.4 主要仪器 | 第21页 |
| 1.5 RT-PCR试剂 | 第21-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.1 大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的分离和培养 | 第24页 |
| 2.2 BMSC表面标记物的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3 BMSC成骨诱导 | 第25-26页 |
| 2.4 BMSC成脂诱导 | 第26页 |
| 2.6 BMSC的周期检测 | 第26-27页 |
| 2.7 慢病毒转染BMSC实验 | 第27-28页 |
| 2.8 实时荧光定量PCR(Real time PCR,RT-PCR) | 第28-30页 |
| 2.9 统计学方法 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30页 |
| 3.1 慢病毒转染后Numb基因表达 | 第30页 |
| 4 小结 | 第30-32页 |
| 第二节 BMSC~(Numb-KD)移植促进BDL大鼠胆汁性肝纤维化的进展 | 第32-43页 |
| 1 材料 | 第32-34页 |
| 1.1 实验动物 | 第32页 |
| 1.2 试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第33-34页 |
| 1.4 主要仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| 2.1 胆总管结扎和脾脏注射BMSC | 第34-35页 |
| 2.2 动物分组 | 第35页 |
| 2.3 肝组织HE染色 | 第35页 |
| 2.4 天狼猩红胶原染色 | 第35页 |
| 2.5 肝组织Hyp含量测定 | 第35-36页 |
| 2.6 免疫组化 | 第36页 |
| 2.7 蛋白免疫印迹 | 第36-37页 |
| 2.8 实时荧光定量PCR | 第37页 |
| 2.9 组织免疫荧光 | 第37页 |
| 2.10 统计学方法 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-42页 |
| 3.1 BMSC~(Numb-KD)移植促进肝纤维化的进展 | 第37-39页 |
| 3.2 BMSC~(Numb-KD)移植促进肝星状细胞的活化 | 第39-40页 |
| 3.3 BMSC Numb-KD移植促进胆管增生 | 第40-42页 |
| 4 小结 | 第42-43页 |
| 第三节 BMSC~(Numb-OE)抑制BDL大鼠胆汁性肝纤维化的进展 | 第43-51页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| 1.1 实验动物 | 第43页 |
| 1.2 试剂 | 第43页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第43页 |
| 1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-45页 |
| 2.1 模型制备及细胞注射 | 第43页 |
| 2.2 分组以及给药 | 第43-44页 |
| 2.3 肝组织HE染色 | 第44页 |
| 2.4 肝组织天狼猩红染色 | 第44页 |
| 2.5 肝组织Hyp含量测定 | 第44页 |
| 2.6 免疫组化 | 第44页 |
| 2.7 蛋白免疫印迹 | 第44页 |
| 2.8 实时荧光定量PCR | 第44页 |
| 2.9 组织免疫荧光 | 第44页 |
| 2.10 统计学方法 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-50页 |
| 3.1 BMSC~(Numb-OE)移植抑制肝纤维化的进展 | 第45-46页 |
| 3.2 BMSC~(Numb-OE)移植抑制肝星状细胞的活化 | 第46-47页 |
| 3.3 BMSC~(Numb-OE)移植抑制胆管增生 | 第47-49页 |
| 3.4 BMSC~(Numb-OE)移植促进肝细胞的增殖 | 第49-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 第二章 Numb基因敲减对黄芪汤抗胆汁淤积性肝纤维化的影响 | 第51-64页 |
| 第一节 BMSC~(Numb-KD)移植对黄芪汤抗胆汁淤积性肝纤维化的影响 | 第51-58页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 实验动物 | 第51页 |
| 1.2 药物 | 第51页 |
| 1.3 主要试剂 | 第51-52页 |
| 1.4 主要仪器 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| 2.1 模型制备及细胞注射 | 第52页 |
| 2.2 分组以及给药 | 第52页 |
| 2.3 肝组织HE染色 | 第52页 |
| 2.4 肝组织天狼猩红染色 | 第52页 |
| 2.5 肝组织Hyp含量测定 | 第52-53页 |
| 2.6 免疫组化 | 第53页 |
| 2.7 蛋白免疫印迹 | 第53页 |
| 2.8 实时荧光定量PCR | 第53页 |
| 2.9 组织免疫荧光 | 第53页 |
| 2.10 统计学方法 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| 3.1 BMSC~(Numb-KD)移植减弱黄芪汤抗胆管增生的作用 | 第53-56页 |
| 3.2 BMSC~(Numb-KD)移植减弱黄芪汤对Notch信号的抑制作用 | 第56-58页 |
| 第二节 Numb-KD对黄芪汤干预WB-F344 细胞分化的影响 | 第58-64页 |
| 1 材料 | 第58页 |
| 1.1 细胞株 | 第58页 |
| 1.2 药物 | 第58页 |
| 1.3 主要试剂 | 第58页 |
| 1.4 Numb基因RNAi慢病毒 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-60页 |
| 2.1 WB-F344的复苏、培养及传代 | 第58-59页 |
| 2.2 建立WB-F344的Numb-KD模型 | 第59页 |
| 2.3 分组以及给药 | 第59页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹 | 第59页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR | 第59页 |
| 2.6 细胞免疫荧光 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-63页 |
| 3.1 Numb-KD减弱黄芪汤干预WB-F344 细胞分化的作用 | 第60-61页 |
| 3.2 Numb-KD降低黄芪汤抑制Notch信号的作用 | 第61-63页 |
| 4 小结 | 第63-64页 |
| 第三章 Numb基因过表达对黄芪汤抗胆汁淤积性肝纤维化的影响 | 第64-73页 |
| 1 材料 | 第64页 |
| 1.1 实验动物 | 第64页 |
| 1.2 药物 | 第64页 |
| 1.3 主要试剂 | 第64页 |
| 1.4 主要仪器 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-66页 |
| 2.1 模型制备及细胞注射 | 第64-65页 |
| 2.2 分组以及给药 | 第65页 |
| 2.3 肝组织HE染色 | 第65页 |
| 2.4 肝组织天狼猩红染色 | 第65页 |
| 2.5 血清生化学 | 第65页 |
| 2.6 肝组织Hyp含量测定 | 第65页 |
| 2.7 免疫组化 | 第65页 |
| 2.8 蛋白免疫印迹 | 第65-66页 |
| 2.9 实时荧光定量PCR | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-72页 |
| 3.1 BMSC~(Numb-OE)移植对黄芪汤抗胆汁性纤维化的影响 | 第66-67页 |
| 3.2 BMSC~(Numb-OE)移植对黄芪汤抗肝星状细胞活化的影响 | 第67-69页 |
| 3.3 BMSC~(Numb-OE)移植对黄芪汤抑制胆管增生作用的影响 | 第69-70页 |
| 3.4 BMSC~(Numb-OE)移植对黄芪汤抑制Notch信号通路的影响 | 第70-72页 |
| 4 小结 | 第72-73页 |
| 讨论 | 第73-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录1 文献综述 Numb基因在肝纤维化治疗中的应用前景 | 第82-92页 |
| 参考文献 | 第87-92页 |
| 附录2 在校期间发表论文 | 第92-93页 |
| 附录3 参加学术会议情况 | 第93页 |
