| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 RNA干扰以及人工miRNA | 第14-25页 |
| ·RNA干扰 | 第14-21页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第14-15页 |
| ·RNA干扰的机制 | 第15-20页 |
| ·RNA干扰在病毒性疾病治疗中的应用 | 第20-21页 |
| ·人工 miRNA(artificial microRNA,amiRNA) | 第21-25页 |
| 第二章 H5N1型禽流感病毒简介以及针对H5N1型禽流感病毒的RNA干扰 | 第25-39页 |
| ·H5N1型禽流感病毒简介 | 第25-37页 |
| ·禽流感病毒及其致病性 | 第25-27页 |
| ·A型流感病毒的形态和结构 | 第27-28页 |
| ·A型流感病毒基因及其蛋白产物 | 第28-34页 |
| ·A型流感病毒的感染过程 | 第34-37页 |
| ·针对H5N1型禽流感病毒基因的RNA干扰 | 第37-38页 |
| ·本研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 第三章 以外源基因的5'-UTR,3'-UTR以及ORF为靶点设计的不同人工miRNA所产生的基因沉默效应的研究 | 第39-73页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·实验仪器 | 第40-41页 |
| ·实验用耗材,化学药品试剂 | 第41页 |
| ·工具酶、试剂盒 | 第41-42页 |
| ·菌种、载体、细胞 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-62页 |
| ·常规实验方法 | 第42-50页 |
| ·基于miR155的人工miRNA表达载体的构建 | 第50-53页 |
| ·报告基因Luc以及Luc-PB2(包括3'-UTR)表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·精选SM155-miRNA靶向基因PB23'-UTR和Luc ORF靶序列以及设计人工miRNA茎环状结构 | 第54-56页 |
| ·构建报告基因表达载体pcDNA3.0/5'-UTR(NP)-Luc-3'-UTR(NP)以及精选SM155-miRNA靶向Luc ORF(包括NP 5'-UTR、3’-UTR)靶序列 | 第56-58页 |
| ·多个串联miRNA表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·不同配对方式靶向NP(3'-UTR)的人工SM155-miRNA设计 | 第59-60页 |
| ·293T细胞培养和转染 | 第60页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第60-61页 |
| ·荧光素酶实验 | 第61-62页 |
| ·研究结果 | 第62-69页 |
| ·基于miR155的人工miRNA表达载体的基因沉默效果以及在293T细胞中报告基因的表达 | 第62-63页 |
| ·针对外源基因5'-UTR,3’-UTR及ORF人工SM155-miRNA的基因沉默效果 | 第63-64页 |
| ·不同茎结构的人工SM155-miRNA对荧光素酶基因ORF沉默效率的影响 | 第64-65页 |
| ·不同茎结构的人工SM155-miRNA对PB2基因3’-UTR沉默效率的影响 | 第65-66页 |
| ·不同茎结构的人工SM155-miRNA诱导干扰素的表达水平 | 第66-68页 |
| ·Seed-match对人工SM155-miRNA靶向NP基因3’-UTR沉默效率的影响 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| 第四章 人工SM155-miRNA对AIV基因沉默效果 | 第73-88页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-80页 |
| ·Luc-PB2以及Luc-NP(包括5’-UTR和3’-UTR)表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·精选对禽流感基因PB2和NP的靶序列以及设计人工miRNA茎环状结构 | 第76-78页 |
| ·293T细胞培养和转染 | 第78页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第78-79页 |
| ·荧光素酶实验 | 第79-80页 |
| ·研究结果 | 第80-85页 |
| ·单个或多个串联人工SM155-miRNA针对PB2基因5'-UTR、ORF及3'-UTR沉默的效率 | 第80-82页 |
| ·单个或多个串联人工SM155-miRNA对NP基因5'-UTR、ORF、3' -UTR的沉默效率 | 第82-85页 |
| ·讨论 | 第85-88页 |
| 研究总结与创新点 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-107页 |
| 博士期间发表论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
