| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一部分 纯培养方法对可可西里土壤细菌多样性的研究 | 第14-23页 |
| 一、材料与方法 | 第14-20页 |
| 1. 土壤样品 | 第14-16页 |
| 2. 培养基 | 第16-19页 |
| 3. 土壤预处理方法 | 第19页 |
| 4. 菌种分离、纯化和保藏 | 第19-20页 |
| 二、结果与讨论 | 第20-23页 |
| 1. 不同土壤样品中细菌的分离情况 | 第20-21页 |
| 2. 可可西里土壤样品IMB08-049中分离株的16S rRNA基因序列分析结果 | 第21-23页 |
| 第二部分 菌株CPCC100076~T的多相分类研究 | 第23-40页 |
| 一、材料与方法 | 第23-34页 |
| 1. 形态和培养特征 | 第23页 |
| 2. 生理生化特征 | 第23-26页 |
| 3. 细胞化学研究 | 第26-29页 |
| 4. 16S rRNA基因扩增 | 第29-30页 |
| 5. 系统发育分析 | 第30页 |
| 6. DNA G+C mol%含量测定 | 第30-34页 |
| 二、结果与讨论 | 第34-40页 |
| 1. 形态观察结果 | 第34-35页 |
| 2. 生理生化实验结果 | 第35-37页 |
| 3. 测试菌株的化学组分分析结果 | 第37页 |
| 4. 菌株的16S rRNA基因分析 | 第37-38页 |
| 5. 菌株的分类研究结果 | 第38-40页 |
| 第三部分 免培养方法对可可西里土样IMB08-049、IMB08-056中细菌多样性的研究 | 第40-67页 |
| (一) 应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法对IMB08-049、IMB08-056土壤样品细菌多样性的研究 | 第40-51页 |
| 一、材料与方法 | 第40-46页 |
| 1. 样品 | 第40页 |
| 2. 主要仪器和设备 | 第40页 |
| 3. PCR引物 | 第40-41页 |
| 4. 土壤基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| 5. 16S rRNA基因V3区基因扩增 | 第42页 |
| 6. PCR产物纯化 | 第42-43页 |
| 7. 试剂准备 | 第43-44页 |
| 8. DGGE电泳 | 第44-45页 |
| 9. 染色 | 第45页 |
| 10. DGGE图谱遗传多样性分析 | 第45页 |
| 11. DGGE条带的回收和转化重新扩增 | 第45页 |
| 12. DGGE回收条带的克隆和转化 | 第45页 |
| 13. DGGE条带的序列测定和同源性比较 | 第45-46页 |
| 二、结果及讨论 | 第46-51页 |
| 1. 可可西里土壤总DNA提取 | 第46-47页 |
| 2. 16S rDNA V3区片段的PCR扩增 | 第47页 |
| 3. DGGE分析 | 第47-50页 |
| 4. DGGE优势条带的测序及序列比对分析 | 第50-51页 |
| (二) 应用16S rRNA基因文库方法对IMB08-049、IMB08-056号土壤细菌多样性的研究材料和方法 | 第51-67页 |
| 一、材料与方法 | 第51-57页 |
| 1. 样品 | 第51页 |
| 2. 主要仪器和设备 | 第51页 |
| 3. 主要试剂及来源 | 第51-52页 |
| 4. 菌株与载体 | 第52页 |
| 5. PCR引物 | 第52页 |
| 6. 分析软件 | 第52页 |
| 7. 培养基 | 第52页 |
| 8. 土壤样品总DNA提取 | 第52-53页 |
| 9. PCR反应 | 第53页 |
| 10. PCR产物纯化 | 第53-54页 |
| 11. PCR产物末端加A反应 | 第54页 |
| 12. 加尾的PCR产物与pGEM-T Easy载体的连接 | 第54页 |
| 13. DH5α感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| 14. 转化和蓝白斑筛选 | 第55页 |
| 15. 16S rRNA基因扩增片段的限制性酶切分析(amplified ribosomal DNArestriction analysis) | 第55-56页 |
| 16. DNA序列测定 | 第56页 |
| 17. 16S rRNA基因的系统发育分析 | 第56页 |
| 18. 统计分析 | 第56页 |
| 19. 核苷酸序列登录号 | 第56-57页 |
| 二、结果与讨论 | 第57-67页 |
| 1. 土壤样品中细菌16S rRNA基因的扩增 | 第57页 |
| 2. 16S rRNA基因的阳性克隆验证 | 第57-58页 |
| 3. 16S rRNA基因扩增片段的限制性酶切片段分析 | 第58-60页 |
| 4. 系统发育分析 | 第60-65页 |
| 5. 文库评价 | 第65页 |
| 6. 纯培养和免培养结果对比 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 文献综述——分子生物学方法在微生物生态学中的应用 | 第72-81页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
