| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-32页 |
| 1 禽类免疫应答的调节 | 第15-22页 |
| ·细胞因子的免疫调节 | 第15-19页 |
| ·畜禽的神经-内分泌-免疫网络调节 | 第19-22页 |
| 2 引起禽类免疫抑制的因素 | 第22-25页 |
| ·番鸭呼肠孤病毒感染的流行病学、临床症状和病理变化 | 第23-25页 |
| ·呼肠孤病毒感染番鸭的免疫抑制 | 第25页 |
| 3 中药多糖的免疫调节作用 | 第25-30页 |
| ·中药多糖对免疫器官的影响 | 第26页 |
| ·中药多糖对免疫细胞的影响 | 第26-28页 |
| ·中药多糖对细胞因子的影响 | 第28-29页 |
| ·中药多糖参与调节神经-内分泌-免疫网络调节 | 第29页 |
| ·黄芪多糖的免疫调节作用 | 第29-30页 |
| ·猴头菇多糖的免疫调节作用 | 第30页 |
| 4 本研究的立题依据、研究内容及研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 番鸭IL-2、IL-6、β-actin基因片段的克隆 | 第32-60页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·质粒和菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第32-33页 |
| ·主要溶液的配制 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-41页 |
| ·引物设计与合成 | 第33页 |
| ·番鸭脾淋巴细胞的分离与诱导培养 | 第33-34页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·番鸭IL-2、IL-6、β-actin基因的RT-PCR | 第35-37页 |
| ·PCR产物目的片段的回收与纯化 | 第37-38页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第38页 |
| ·IL-2 cDNA与pMD18T-simple vector的连接及转化 | 第38-39页 |
| ·重组质粒少量提取 | 第39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·pMD18T-simple/IL-2、IL-6和β-actin PCR产物序列测定与分析 | 第40页 |
| ·番鸭IL-2基因序列的同源性比较 | 第40-41页 |
| ·番鸭IL-2推导氨基酸序列比较 | 第41页 |
| ·番鸭IL-2分子二级结构的初步预测 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-55页 |
| ·番鸭IL-2、IL-6、β-actin基因RT-PCR扩增结果 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pMD18T-simple/IL-2的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pMD18T-simple/IL-2的测序结果与分析 | 第43-50页 |
| ·IL-6 PCR产物的序列测定结果与比较分析 | 第50-52页 |
| ·β-actin PCR产物序列测定结果与比较分析 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| ·番鸭IL-2基因克隆 | 第55-57页 |
| ·番鸭IL-6基因克隆 | 第57-58页 |
| ·番鸭β-actin基因克隆 | 第58-60页 |
| 第三章 番鸭IL-2原核表达载体的构建及诱导表达 | 第60-73页 |
| 1 材料 | 第60-61页 |
| ·质粒和菌株 | 第60页 |
| ·工具酶和相关试剂 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·主要试剂的配制 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-65页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第61页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第61-63页 |
| ·重组表达质粒pGEX6p-1/MdIL-2在大肠杆菌中的表达 | 第63页 |
| ·表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定 | 第63页 |
| ·诱导表达时间的优化 | 第63页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第63页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第63-64页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析和Western-blotting初步鉴定 | 第64页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第64-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-69页 |
| ·表达载体鉴定结果 | 第65-66页 |
| ·pGEX6p-1/MdIL-2融合蛋白的表达 | 第66-68页 |
| ·诱导表达产物的Western-blotting分析 | 第68页 |
| ·pGEX6p-1/MdIL-2融合蛋白的表达形式 | 第68-69页 |
| ·IL-2放射性免疫检测结果 | 第69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| ·IL-2的生物学活性及其作用特点 | 第69-70页 |
| ·表达载体对表达的产量及生物学活性影响 | 第70-71页 |
| ·表达产物的分布 | 第71页 |
| ·蛋白诱导表达的条件 | 第71页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第71-73页 |
| 第四章 番鸭呼肠孤病毒病自然感染发病模型的建立 | 第73-80页 |
| 1 材料 | 第73页 |
| ·试验毒株 | 第73页 |
| ·试验番鸭种蛋和1日龄雏番鸭 | 第73页 |
| ·主要仪器设备 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| 2 方法 | 第73-75页 |
| ·番鸭呼肠孤病毒的扩增 | 第73-74页 |
| ·病毒感染力的测定 | 第74-75页 |
| ·同居感染模拟番鸭呼肠孤病毒自然感染 | 第75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-79页 |
| ·细胞病变结果观察与TCID_(50)统计 | 第75-76页 |
| ·同居感染MDRV雏番鸭的临床症状和剖检病变 | 第76-79页 |
| ·番鸭呼肠病毒病自然感染发病模型的确定 | 第79页 |
| 4 讨论 | 第79-80页 |
| 第五章 中药多糖对MDRV免疫抑制番鸭的免疫调节作用 | 第80-98页 |
| 1 材料 | 第80页 |
| ·试验毒株 | 第80页 |
| ·试验雏番鸭 | 第80页 |
| ·主要仪器设备 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-82页 |
| ·试验用中药多糖的筛选 | 第80-81页 |
| ·中药多糖饮水剂量的选择 | 第81页 |
| ·黄芪多药和猴头菇多糖对番鸭呼肠孤病毒引起免疫抑制的干预作用 | 第81-82页 |
| 3 结果与分析 | 第82-95页 |
| ·猴头菇多糖和黄芪多糖防治MDRV感染饮水口服浓度的确定 | 第82-86页 |
| ·黄芪多糖和猴头菇多糖对MDRV感染雏番鸭的保护效果 | 第86-95页 |
| ·血清制备 | 第95页 |
| ·脾脏样品制备 | 第95页 |
| 4 讨论 | 第95-98页 |
| ·试验进一步验证番鸭呼肠孤病毒病自然感染发病模型成功建立 | 第95页 |
| ·黄芪多糖和猴头菇多糖在试验番鸭中的使用与饮水口服浓度 | 第95-96页 |
| ·黄芪多糖和猴头菇多糖对呼肠孤病毒感染番鸭防防保护作用 | 第96-97页 |
| ·黄芪多糖和猴头菇多糖对呼肠孤病毒感染番鸭治疗作用 | 第97-98页 |
| 第六章 中药多糖对MDRV免疫抑制番鸭血清白细胞介素、神经介质和激素的影响 | 第98-132页 |
| 1 实验材料 | 第98-99页 |
| ·番鸭血清 | 第98页 |
| ·试剂 | 第98页 |
| ·仪器设备 | 第98-99页 |
| 2 实验方法 | 第99-104页 |
| ·标本采集 | 第99页 |
| ·放免检测方法 | 第99-104页 |
| ·数据处理 | 第104页 |
| 3 结果与分析 | 第104-123页 |
| ·番鸭血清白细胞介素1(IL-1)含量 | 第104-106页 |
| ·番鸭血清白细胞介素2(IL-2)含量 | 第106-107页 |
| ·番鸭血清白细胞介素4(IL-4)含量 | 第107-109页 |
| ·番鸭血清白细胞介素6(IL-6)含量 | 第109-110页 |
| ·番鸭血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量 | 第110-112页 |
| ·番鸭血清糖皮质激素(GC)含量 | 第112-113页 |
| ·番鸭血清生长激素(GH)含量 | 第113-115页 |
| ·番鸭血清β-内啡肽(β-EP)含量 | 第115-117页 |
| ·各检测指标相对含量的变化趋势 | 第117-123页 |
| 4 讨论 | 第123-132页 |
| ·MDRV感染对番鸭血清部分细胞因子、神经递质和激素的影响 | 第123-125页 |
| ·黄芪多糖(APS)对MDRV感染番鸭的血清检测指标的影响 | 第125-127页 |
| ·猴头菇多糖(HPS)对MDRV感染番鸭的血清检测指标的影响 | 第127-129页 |
| ·神经-内分泌-免疫网络调节 | 第129-132页 |
| 第七章 两种多糖对MDRV免疫抑制番鸭IL-2和IL-6 mRNA转录水平的影响 | 第132-152页 |
| 1 材料 | 第132页 |
| ·番鸭脾脏组织 | 第132页 |
| ·主要试剂 | 第132页 |
| ·主要仪器设备 | 第132页 |
| 2 方法 | 第132-136页 |
| ·荧光相对定量PCR引物设计 | 第132-133页 |
| ·总RNA的提取与质量检测 | 第133页 |
| ·总RNA的反转录 | 第133-134页 |
| ·MdIL-2mRNA和MdIL-6mRNA相对定量RT-PCR检测方法的建立 | 第134-135页 |
| ·相对定量RT-PCR检测MdIL-2mRNA、MdIL-6mRNA转录水平 | 第135-136页 |
| ·数据处理 | 第136页 |
| 3 结果与分析 | 第136-147页 |
| ·总RNA质量的鉴定 | 第136页 |
| ·PCR检测目的基因引物 | 第136-137页 |
| ·熔解曲线 | 第137-139页 |
| ·标准曲线 | 第139-140页 |
| ·相对定量结果 | 第140-147页 |
| 4 讨论 | 第147-152页 |
| ·关于荧光相对定量RT-PCR的方法 | 第147-149页 |
| ·试验番鸭脾脏组织IL-6mRNA和IL-2mRNA表达的影响 | 第149页 |
| ·试验番鸭脾脏组织IL-2mRNA表达量与血清IL-2含量的比较 | 第149-150页 |
| ·试验番鸭脾脏组织IL-6mRNA表达量与血清IL-6含量的比较 | 第150-151页 |
| ·mRNA水平与细胞合成蛋白质的水平关系 | 第151-152页 |
| 第八章 全文总结 | 第152-154页 |
| 1 本研究结论 | 第152-153页 |
| 2 本研究创新点 | 第153页 |
| 3 本研究还需进一步解决的问题 | 第153-154页 |
| 参考文献 | 第154-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
| 附录一:IL-2基因核苷酸多序列比较结果 | 第166-168页 |
| 附录二:IL-2基因核苷酸推导氨基酸序列比较结果 | 第168-169页 |
| 附录三:放免检测结果 | 第169-172页 |
| 附录四:样品总RNA OD_(260)/OD_(280)值 | 第172-174页 |
| 附录五:相对定量RT-PCR检测结果 | 第174-175页 |
