| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-19页 |
| 第一部分 小鼠 NF-κB p65siRNA 的设计、合成及对体外 EOMA 细胞 NF-κB p65表达的影响 | 第19-48页 |
| 第一节 siRNA 的设计、合成 | 第19-24页 |
| 一、方法 | 第19-20页 |
| 二、讨论 | 第20-23页 |
| 参考文献 | 第23-24页 |
| 第二节 siRNA 以 Lipofectamine?2000 为载体对血管内皮细胞体外转染的研究 | 第24-34页 |
| 一、材料 | 第24页 |
| 二、方法 | 第24-26页 |
| (一) 实验准备 | 第24-25页 |
| (二) 转染过程 | 第25-26页 |
| (三) 转染效率的测定 | 第26页 |
| (四) MTT 法检测转染复合物对细胞毒性作用的评定 | 第26页 |
| 三、结果 | 第26-27页 |
| (一) NF-κB p65siRNA 和阴性对照 siRNA 分别转染小鼠血管内皮细胞后荧光显微镜检查 | 第26-27页 |
| (二) 转染效率的测定 | 第27页 |
| (三) 转染混合物对转染细胞的毒性检测 | 第27页 |
| 四、讨论 | 第27-30页 |
| 参考文献 | 第30-34页 |
| 第三节 小鼠 NF-κB p65 siRNA 对 EOMA 细胞 NF-κB p65 表达影响的研究 | 第34-48页 |
| 一、材料 | 第34-37页 |
| 二、方法 | 第37-44页 |
| (一) 实验分组 | 第37页 |
| (二) 细胞接种 | 第37页 |
| (三) 转染方法 | 第37-38页 |
| (四) 细胞总 RNA 的提取:TRIzol 法提取未转染的 EOMA 细胞和转染siRNA 24h 后的 EOMA 细胞总 RNA | 第38-40页 |
| (五) DNase I 的处理 | 第40页 |
| (六) 半定量 RT-PCR 测定细胞内 NF-κB p65mRNA 水平 | 第40-43页 |
| (七) Real Time-PCR | 第43页 |
| (八) Western blotting 法测定各组细胞 NF-κB p65 蛋白表达 | 第43-44页 |
| 三、结 果 | 第44-45页 |
| 1. 各组细胞内 NF-κB p65mRNA 水平的变化 | 第44-45页 |
| 2. 各组细胞内 NF-κB p65 蛋白表达的变化 | 第45页 |
| 四、讨 论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第二部分 RNAi 特异性抑制 NF-κB p65 抗异种移植延迟性排斥反应的可行性研究 | 第48-67页 |
| 一、材料 | 第48-50页 |
| 二、方法 | 第50-56页 |
| (一) siRNA 体内转染 | 第50页 |
| (二) 转染混合物的准备 | 第50-51页 |
| (三) 注射方法 | 第51页 |
| (四) 组织学检查 | 第51页 |
| (五) 组织总 RNA 提取 | 第51-53页 |
| (六) DNase I 的处理 | 第53页 |
| (七) 半定量 RT-PCR 测定组织细胞内 NF-κB p65mRNA 水平 | 第53-56页 |
| (八) Real Time-PCR | 第56页 |
| (九) 生物学毒性评估 | 第56页 |
| (十) 统计学分析 | 第56页 |
| 三、结果 | 第56-61页 |
| (一) 体内转染注射途径的选择 | 第56-57页 |
| (二) 转染剂量的选择 | 第57-58页 |
| (三) 转染时效的分析 | 第58-59页 |
| (四) 毒性试验 | 第59-60页 |
| (五) 小鼠体内转染 NF-κB p65 siRNA 对心脏 NF-κB 下游基因表达的影响 | 第60-61页 |
| 四、讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 第三部分 RNAi 特异性抑制 NF-κB p65 抗心脏移植延迟性排斥反应的研究 | 第67-88页 |
| 一、材料 | 第68-69页 |
| 二、方法 | 第69-78页 |
| (一) 实验分组 | 第69-70页 |
| (二) siRNA 体内转染 | 第70页 |
| (三) 转染混合物的准备 | 第70页 |
| (四) 注射方法 | 第70页 |
| (五) 移植模型的建立 | 第70-72页 |
| (六)供心存活时间观察 | 第72页 |
| (七) 组织学检查 | 第72页 |
| (八) 大鼠血清 IgM、IgG 的检测 | 第72页 |
| (九) 组织总 RNA 提取 | 第72-74页 |
| (十) DNase I 的处理 | 第74-75页 |
| (十一) 各目的基因 PCR 引物的设计、合成以及相应的反应条件 | 第75页 |
| (十二) 半定量 RT-PCR 测定组织内 NF-κB p65mRNA 水平 | 第75-78页 |
| (十三) Real Time-PCR | 第78页 |
| (十四) 统计学分析 | 第78页 |
| 三、结果 | 第78-83页 |
| (一) 供心存活时间的观察 | 第78-79页 |
| (二) 受体大鼠体内诱生抗体的检测 | 第79页 |
| (三) 移植心脏组织病理学检查 | 第79-80页 |
| (四) 移植心脏电镜观察 | 第80页 |
| (五) 移植后小鼠心脏 NF-κB p65 mRNA 表达分析 | 第80-81页 |
| (六) siRNA 对 NF-κB 下游基因表达的影响 | 第81-83页 |
| 四、讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 附图 | 第89-94页 |
| 缩略词表 | 第94-96页 |
| 综述一 灵长类非协调性异种移植当今世界实践经验和状况 | 第96-123页 |
| 综述二 RNAi 研究进展 | 第123-148页 |
| 攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-151页 |
