| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 昆虫神经肽激素Bombyxin 基因研究进展 | 第14-41页 |
| 1 Bombyxin 基因的结构、转录、表达调控 | 第14-22页 |
| ·Bombyxin的发现、活性鉴定和提取纯化 | 第14-16页 |
| ·Bombyxin的肽结构 | 第16-18页 |
| ·Bombyxin的基因结构 | 第18-20页 |
| ·Bombyxin的进化过程 | 第20页 |
| ·Bombyxin的细胞表达和体内动态 | 第20-22页 |
| ·Bombyxin的转录元件及其表达形式 | 第22页 |
| 2 Bombyxin 基因的功能 | 第22-31页 |
| ·保守胰岛素信号转导通路的功能和意义 | 第23-24页 |
| ·代谢 | 第24-25页 |
| ·细胞大小及发育 | 第25-27页 |
| ·卵巢成熟与繁殖 | 第27-29页 |
| ·寿命与抗逆 | 第29-30页 |
| ·其他功能 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-41页 |
| 第二章 RNAi和转机基因技术在昆虫功能基因研究中的应用 | 第41-69页 |
| 1 昆虫RNAi 技术概述 | 第41-47页 |
| ·RNA干涉的定义及其分子机制 | 第41-43页 |
| ·昆虫RNAi的实现方法 | 第43-44页 |
| ·昆虫dsRNA的导入技术 | 第44-47页 |
| 2 昆虫RNAi 技术应用的研究进展 | 第47-50页 |
| ·昆虫RNAi的系统性 | 第47页 |
| ·RNAi技术在昆虫神经肽功能研究中的应用 | 第47-48页 |
| ·RNAi技术在家蚕基因功能研究中的应用 | 第48-50页 |
| 3 家蚕转基因 | 第50-60页 |
| ·常用转基因载体 | 第51-54页 |
| ·外源基因的导入方法 | 第54-57页 |
| ·家蚕转基因的应用 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 第三章 研究目的与内容 | 第69-72页 |
| 1 研究目的 | 第69-70页 |
| 2 研究内容 | 第70-71页 |
| 3 技术路线 | 第71-72页 |
| 第四章 一般材料和常用方法 | 第72-85页 |
| 1 实验材料 | 第72-73页 |
| ·生物材料 | 第72页 |
| ·工具酶 | 第72页 |
| ·试剂盒 | 第72页 |
| ·其他试剂 | 第72-73页 |
| ·引物合成及测序 | 第73页 |
| 2 主要溶液及试剂配制 | 第73-78页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第73-78页 |
| 3 常用仪器设备 | 第78-80页 |
| ·金泽大学理学部发生生物学研究室实验设备 | 第78-79页 |
| ·苏州大学医学部生物化学与分子生物学研究室实验设备 | 第79-80页 |
| 4 常规方法 | 第80-84页 |
| ·家蚕饲养 | 第80页 |
| ·基因克隆 | 第80-81页 |
| ·RT-PCR | 第81-82页 |
| ·家蚕及其组织基因组的提取 | 第82-83页 |
| ·细胞培养 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-85页 |
| 第五章 家蚕类胰岛素基因BBX-B8 的表达谱 | 第85-94页 |
| 1 材料和方法 | 第86-87页 |
| ·家蚕饲养 | 第86页 |
| ·家蚕组织解剖 | 第86页 |
| ·RNA的抽提 | 第86页 |
| ·BBX-B8的克隆及序列测定 | 第86页 |
| ·RT-PCR检测BBX-B8基因在家蚕各组织中的表达 | 第86-87页 |
| ·Western boltting检测BBX-B8基因在5龄家蚕脑中的表达 | 第87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-91页 |
| ·BBX-B8目的片段的克隆 | 第87-88页 |
| ·BBX-B8序列及其功能结构分析 | 第88-90页 |
| ·BBX-B8在各组织中的表达 | 第90-91页 |
| ·BBX-B8基因在家蚕5龄幼虫脑中的表达动态 | 第91页 |
| 3 讨论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 第六章 下调BBX-B8 基因表达的RNAi 家蚕模型的建立 | 第94-103页 |
| 1 材料和方法 | 第95-97页 |
| ·dsRNA的制备 | 第95-96页 |
| ·家蚕饲养和RNAi处理 | 第96页 |
| ·半定量RT-PCR | 第96页 |
| ·Western blotting检测 | 第96-97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-100页 |
| ·dsRNA的制备与质量检测 | 第97-98页 |
| ·dsRNA对家蚕脑中BBX-B8 mRNA水平的影响 | 第98-99页 |
| ·dsRNA对家蚕脑中Bombyxin蛋白水平的影响 | 第99-100页 |
| 3 讨论 | 第100页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 第七章 抑制BBX-B8 基因的表达对家蚕器官发育、生殖和抗逆能力的影响 | 第103-114页 |
| 1 材料和方法 | 第104页 |
| ·材料 | 第104页 |
| ·下调BBX-B8基因表达对家蚕组织形态的影响 | 第104页 |
| ·下调BBX-B8基因表达对家蚕产卵量的影响 | 第104页 |
| ·下调BBX-B8基因表达对家蚕耐高温、低温和饥饿能力的影响 | 第104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-109页 |
| ·延缓脑的发育 | 第104-106页 |
| ·影响翅的发育 | 第106-107页 |
| ·生殖力的改变 | 第107-108页 |
| ·对家蚕耐高温、低温和饥饿能力的影响 | 第108-109页 |
| 3 讨论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 第八章 抑制BBX-B8 基因的表达对家蚕保护性酶活力及代谢的影响 | 第114-128页 |
| 1 材料和方法 | 第115-117页 |
| ·材料 | 第115页 |
| ·RNAi | 第115页 |
| ·血淋巴样品采集 | 第115页 |
| ·SOD酶活性的测定 | 第115页 |
| ·CAT酶活性测定 | 第115-116页 |
| ·T-AOC测定 | 第116页 |
| ·血液海藻糖的测定 | 第116-117页 |
| ·海藻糖酶测定 | 第117页 |
| 2 结果与分析 | 第117-124页 |
| ·抑制BBX-B8基因表达对SOD活性的影响 | 第117-119页 |
| ·抑制BBX-B8基因表达对CAT活性的影响 | 第119-120页 |
| ·抑制BBX-B8基因表达对T-AOC水平的影响 | 第120-121页 |
| ·抑制BBX-B8基因表达对血液海藻糖水平的影响 | 第121-123页 |
| ·对血液海藻糖酶的影响 | 第123-124页 |
| 3 讨论 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-128页 |
| 第九章 过表达BBX-B8 家蚕细胞系的建立及其特性 | 第128-139页 |
| 1 材料和方法 | 第129-132页 |
| ·材料 | 第129页 |
| ·点突变及其转基因载体的构建 | 第129-130页 |
| ·家蚕BmN细胞的转染 | 第130页 |
| ·转BBX-B8w和BBX-B8m基因细胞系的筛选 | 第130页 |
| ·转化细胞的分子鉴定 | 第130-131页 |
| ·转基因细胞系BBX-B8过表达检测 | 第131页 |
| ·转基因细胞系生物学特性的观察 | 第131页 |
| ·转基因细胞的病毒感染调查 | 第131-132页 |
| 2 结果与分析 | 第132-137页 |
| ·转基因载体的鉴定 | 第132-133页 |
| ·转基因细胞的筛选 | 第133页 |
| ·转化细胞株的分子鉴定 | 第133-134页 |
| ·BBX-B8w和BBX-B8m基因在转化细胞中的过表达 | 第134-135页 |
| ·转基因细胞株的生长特性 | 第135-136页 |
| ·转基因细胞株的病毒感染测定 | 第136-137页 |
| 3 讨论 | 第137页 |
| 参考文献 | 第137-139页 |
| 第十章 转基因过表达BBX-B8 对家蚕的影响 | 第139-153页 |
| 1 材料和方法 | 第140-141页 |
| ·材料 | 第140页 |
| ·方法 | 第140-141页 |
| 2 结果与分析 | 第141-149页 |
| ·转基因家蚕的筛选与鉴定 | 第141-142页 |
| ·转基因家蚕的分子鉴定 | 第142-143页 |
| ·转基因蚕GFP和BBX-B8的mRNA检测 | 第143-144页 |
| ·表达产物BBX-B8w的生物学活性测定 | 第144-146页 |
| ·BBX-B8过表达对家蚕发育的影响 | 第146-147页 |
| ·转基因过表达BBX-B8对家蚕化性的影响 | 第147-148页 |
| ·转基因过表达BBX-B8对家蚕丝蛋白合成的影响 | 第148-149页 |
| 3 讨论 | 第149-151页 |
| 参考文献 | 第151-153页 |
| 结论 | 第153-154页 |
| 1 研究结论 | 第153页 |
| 2 有待进一步探讨的问题 | 第153-154页 |
| 附录1：攻读学位期间科研成果 | 第154-156页 |
| 附录2：文中所用缩略语 | 第156-158页 |
| 致谢 | 第158-159页 |
