| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 痘病毒感染宿主范围差异研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 痘病毒免疫调节分子及其调节宿主免疫的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3 PKR蛋白抗病毒作用的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 K3L蛋白在痘苗病毒感染机制中的研究 | 第17-19页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 SPV与GPV感染Vero细胞的转录组差异研究 | 第21-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第21-22页 |
| 2.2.2 病毒感染 | 第22页 |
| 2.2.3 总RNA的提取及检测 | 第22页 |
| 2.2.4 RNA标记 | 第22-27页 |
| 2.2.5 芯片杂交 | 第27页 |
| 2.2.6 芯片的清洗染色及扫描 | 第27页 |
| 2.2.7 数据提取及分析 | 第27页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR验证 | 第27-28页 |
| 2.3 试验结果 | 第28-33页 |
| 2.3.1 病毒感染 | 第28-29页 |
| 2.3.2 RNA提取及检测 | 第29-30页 |
| 2.3.3 SPV感染宿主转录组变化 | 第30-31页 |
| 2.3.4 GPV感染宿主转录组变化 | 第31-32页 |
| 2.3.5 SPV感染细胞转录组变化与GPV感染细胞转录组变化差异 | 第32页 |
| 2.3.6 Real time PCR验证测序结果 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 SPV与GPV感染Vero细胞的蛋白组差异研究 | 第35-58页 |
| 3.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 试验试剂 | 第35页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第35-36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第36页 |
| 3.2.2 病毒感染 | 第36-37页 |
| 3.2.3 蛋白提取 | 第37页 |
| 3.2.4 蛋白质纯化 | 第37页 |
| 3.2.5 蛋白质定量 | 第37页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37-39页 |
| 3.2.7 酶切 | 第39-40页 |
| 3.2.8 肽段抽提 | 第40页 |
| 3.2.9 质谱鉴定 | 第40页 |
| 3.2.10 数据检索 | 第40页 |
| 3.2.11 免疫荧光试验 | 第40页 |
| 3.2.12 免疫印迹试验 | 第40页 |
| 3.3 试验结果 | 第40-56页 |
| 3.3.1 SILAC标记效率的评价 | 第40-41页 |
| 3.3.2 细胞培养及病毒感染 | 第41-42页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE检测细胞蛋白是否降解及蛋白定量分析 | 第42-43页 |
| 3.3.4 SPV感染宿主蛋白组变化 | 第43-48页 |
| 3.3.5 GPV感染细胞蛋白组变化 | 第48-53页 |
| 3.3.6 GPV与SPV感染宿主细胞蛋白组学差异 | 第53-56页 |
| 3.3.7 蛋白质鉴定和定量的验证 | 第56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 羊痘病毒K3L激活并抑制抗病毒蛋白PKR特异性抑制病毒的复制 | 第58-71页 |
| 4.1 试验材料 | 第59页 |
| 4.1.1 细胞和病毒 | 第59页 |
| 4.1.2 试剂和抗体 | 第59页 |
| 4.2 试验方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1 病毒感染 | 第59-60页 |
| 4.2.2 免疫印迹分析 | 第60页 |
| 4.2.3 质粒的构建及转染 | 第60页 |
| 4.2.4 si RNA转染 | 第60页 |
| 4.2.5 PKR和K3L的共定位 | 第60-61页 |
| 4.2.6 免疫沉淀 | 第61页 |
| 4.2.7 实时定量PCR | 第61页 |
| 4.2.8 反转录PCR | 第61页 |
| 4.2.9 荧光素酶分析 | 第61-62页 |
| 4.2.10 统计分析 | 第62页 |
| 4.3 试验结果 | 第62-69页 |
| 4.3.1 SPV感染触发PKR和e IF2α蛋白磷酸化 | 第62页 |
| 4.3.2 外源性的PKR的表达可抑制SPV病毒的复制 | 第62-63页 |
| 4.3.3 抑制PKR表达可促进SPV在Hela和OA3细胞中的复制 | 第63-66页 |
| 4.3.4 SPV的K3L可抑制PKR介导的抗病毒作用 | 第66-67页 |
| 4.3.5 CPV-K3L同源物以物种特异性的方式抑制PKR | 第67-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 K3L在SPV与GPV感染宿主范围差异中的作用分析 | 第71-102页 |
| 5.1 研究方法 | 第71-74页 |
| 5.1.1 基因序列 | 第71-73页 |
| 5.1.2 软件和平台 | 第73页 |
| 5.1.3 同源结构模型构建及能量优化 | 第73页 |
| 5.1.4 同源建模与分子对接 | 第73-74页 |
| 5.2 试验结果 | 第74-100页 |
| 5.2.1 目标蛋白同源建模及结构优化 | 第74-80页 |
| 5.2.2 分子对接及结构优化 | 第80-90页 |
| 5.2.3 计算分析K3L-PKR结合能力与e IF2α-PKR结合能力差异 | 第90-95页 |
| 5.2.4 造成相互作用能差异的关键氨基酸分析 | 第95-100页 |
| 5.2.5 不同蛋白质-蛋白质相互作用汇总及各复合物结合能比较 | 第100页 |
| 5.3 讨论 | 第100-102页 |
| 第六章 全文结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-114页 |
| 附录 | 第114-158页 |
| 致谢 | 第158-159页 |
| 作者简历 | 第159页 |
