| 英文缩略词 | 第10-13页 |
| 中文摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 前言 | 第17-22页 |
| 材料与方法 | 第22-53页 |
| 一、实验材料 | 第22-34页 |
| 1. 人组织及血液样本 | 第22页 |
| 2. 细胞系 | 第22页 |
| 3. 实验动物及饲养条件 | 第22-23页 |
| 4. 菌株与质粒 | 第23页 |
| 5. 主要试剂 | 第23-27页 |
| 6. 相关溶液和试剂的配制 | 第27-30页 |
| 7. 引物 | 第30-34页 |
| 二、实验方法 | 第34-53页 |
| 1. 细胞培养 | 第34-36页 |
| 2. XBP1-PLVX-CMV表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 3. Cas9/gRNA敲除质粒构建 | 第39页 |
| 4. 细菌的转化 | 第39-40页 |
| 5. 质粒DNA的提取 | 第40页 |
| 6. 哺乳动物细胞转染 | 第40页 |
| 7. THP-1单核细胞分化为巨噬细胞 | 第40页 |
| 8. RNA的提取 | 第40-41页 |
| 9. RT-PCR扩增 | 第41-42页 |
| 10. Real-time PCR反应 | 第42-43页 |
| 11. 细胞总蛋白提取 | 第43页 |
| 12. 蛋白质浓度测定(BCA Protein Assay Kit,Thermo Scientific.) | 第43页 |
| 13. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹 | 第43-44页 |
| 14. 检测转移到硝酸纤维素膜上的目的蛋白 | 第44-45页 |
| 15. 小鼠的繁育和性别鉴定 | 第45页 |
| 16. 结直肠癌模型小鼠的构建及取材 | 第45-47页 |
| 17. 裸鼠致瘤实验 | 第47页 |
| 18. 小鼠腹腔注射 | 第47页 |
| 19. 小鼠脾单核细胞分离 | 第47页 |
| 20. 流式细胞仪检测小鼠结肠癌组织巨噬细胞表面标志物 | 第47-48页 |
| 21. 流式细胞仪检测人结肠癌组织巨噬细胞表面标志物 | 第48页 |
| 22. ELISA检测细胞因子 | 第48-49页 |
| 23. 染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP) | 第49页 |
| 24. 免疫荧光(冰冻切片) | 第49-50页 |
| 25. 石蜡组织免疫组织化学检测 | 第50页 |
| 26. 骨髓细胞提取及诱导 | 第50-51页 |
| 27. 条件培养基的制备 | 第51-52页 |
| 28. 吞噬实验 | 第52页 |
| 29. 统计学分析 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-87页 |
| 一、肿瘤微环境中TAM具有促瘤作用 | 第53-58页 |
| 1. 巨噬细胞在结直肠肿瘤组织中大量浸润 | 第53-55页 |
| 2. 肿瘤上清诱导的巨噬细胞在肿瘤微环境中具有促瘤作用 | 第55-56页 |
| 3. 剔除体内巨噬细胞可以抑制结直肠癌的发展 | 第56-57页 |
| 4. 结直肠癌TAM特征分子的表达与患者预后不良相关 | 第57-58页 |
| 二、肿瘤相关巨噬细胞中XBP1信号通路激活 | 第58-67页 |
| 1. 肿瘤微环境中巨噬细胞从抑瘤向促瘤发生改变 | 第58-59页 |
| 2. 结直肠癌患者肿瘤相关巨噬细胞中内质网应激信号通路活化 | 第59-61页 |
| 3. AOM-DSS小鼠模型肿瘤中相关巨噬细胞中内质网应激信号通路活化 | 第61-63页 |
| 4. 荷瘤小鼠肿瘤组织中的巨噬细胞XBP1通路激活 | 第63-64页 |
| 5. 体外证实巨噬细胞向TAM转化与XBP1的活化相关 | 第64-67页 |
| 三、TAM中XBP1的激活促进结直肠癌的发展 | 第67-73页 |
| 1. 建立特异性敲除XBP1的巨噬细胞株 | 第67-68页 |
| 2. 特异性敲除Ana-1中XBP1的表达抑制其促瘤能力 | 第68页 |
| 3. TAM中XBP1信号通路促进结直肠癌细胞肺转移 | 第68-70页 |
| 4. TAM中XBP1信号通路影响结直肠癌细胞肝转移的能力 | 第70-73页 |
| 四、XBP1促进巨噬细胞细胞因子的表达 | 第73-77页 |
| 1. 敲除XBP1会影响TAM多种细胞因子的表达 | 第73-74页 |
| 2. XBP1的激活抑制剂4μ8c改变多种细胞因子的表达 | 第74-75页 |
| 3. XBP1促进巨噬细胞细胞因子的分泌 | 第75-77页 |
| 4. XBP1直接调控IL-6和S100A9的转录 | 第77页 |
| 五、XBP1抑制巨噬细胞清除肿瘤细胞 | 第77-82页 |
| 1. XBP1影响巨噬细胞对肿瘤细胞的清除功能 | 第77-79页 |
| 2. XBP1影响巨噬细胞对肿瘤细胞的自体识别 | 第79-81页 |
| 3. Sirpα单抗治疗AOM-DSS结直肠癌小鼠 | 第81-82页 |
| 六、靶向TAM中XBP1活化抑制剂治疗 | 第82-83页 |
| 七、Cetuximab靶向EGFR治疗抑制巨噬细胞中XBP1的活化 | 第83-87页 |
| 1. Cetuximab治疗抑制巨噬细胞中XBP1的激活 | 第83-85页 |
| 2. 敲除EGFR削弱肿瘤培养上清对巨噬细胞XBP1的激活作用 | 第85-87页 |
| 讨论 | 第87-93页 |
| 一、肿瘤相关巨噬细胞在结直肠肿瘤发生发展中作用 | 第87-88页 |
| 二、XBP1与TAM功能改变的关系 | 第88-92页 |
| 1. 肿瘤微环境对TAM的影响 | 第88-89页 |
| 2. XBP1对TAM功能的影响 | 第89-92页 |
| 三、展望 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 文献综述 | 第94-109页 |
| 一、XBP1的结构特点及特殊的激活形式 | 第95-97页 |
| 二、XBP1在内质网应激反应中的重要作用 | 第97-99页 |
| 三、XBP1的生理生化功能 | 第99-101页 |
| 四、肿瘤中XBP1的相关研究 | 第101-106页 |
| 1、恶性肿瘤细胞中UPR的生理机能 | 第101-102页 |
| 2、改变肿瘤相关髓系细胞的编程 | 第102-103页 |
| 3、在肿瘤细胞与骨髓细胞交流中的作用 | 第103页 |
| 4、T细胞在生理和病理条件下的作用 | 第103-106页 |
| 五、人类其他疾病中XBP1的相关研究 | 第106-107页 |
| 六、展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-127页 |
| 研究生期间发表论文及参加会议情况 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129-132页 |
