| 致谢 | 第1-8页 |
| 本文主要英文缩写词 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 1 对虾白斑综合征和对虾白斑综合征病毒 | 第12-19页 |
| ·对虾白斑综合征的病理特征及病理变化 | 第12-13页 |
| ·对虾白斑综合征病毒的基本特征 | 第13-15页 |
| ·WSSV分子生物学进展 | 第15-17页 |
| ·WSS的诊断 | 第17-19页 |
| 2 单克隆抗体研究进展 | 第19-23页 |
| ·抗体与单克隆抗体 | 第19-21页 |
| ·单克隆抗体的制备与运用 | 第21-22页 |
| ·单克隆抗体在对虾病毒检测中的应用 | 第22-23页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 对虾白斑综合征病毒的分离纯化 | 第24-32页 |
| 1 试验材料 | 第25页 |
| ·种毒来源 | 第25页 |
| ·试验动物 | 第25页 |
| ·培养基及主要化学试剂的配制 | 第25页 |
| ·其它材料 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-28页 |
| ·种毒处理 | 第25-26页 |
| ·病毒在螯虾体内的增殖 | 第26页 |
| ·螯虾鳃组织基因组提取 | 第26页 |
| ·引物设计(检测用) | 第26页 |
| ·PCR反应体系和条件 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的凝胶电泳 | 第27页 |
| ·病毒的分离纯化 | 第27-28页 |
| ·电镜观察 | 第28页 |
| 3 试验结果 | 第28-30页 |
| ·螯虾接种后的临床症状 | 第28页 |
| ·PCR检测结果 | 第28页 |
| ·纯化病毒粒子的形态学观察 | 第28-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| ·WSSV的增殖 | 第30页 |
| ·WSSV的分离纯化 | 第30-31页 |
| ·WSSV病毒粒子的形态观察 | 第31-32页 |
| 第三章 对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第32-46页 |
| 1 基因克隆及表达策略 | 第33-35页 |
| ·基因克隆策略 | 第33-34页 |
| ·基因表达策略 | 第34-35页 |
| 2 试验材料 | 第35-37页 |
| ·病毒 | 第35页 |
| ·菌种和质粒 | 第35页 |
| ·引物设计: | 第35页 |
| ·培养基及主要化学试剂的配制 | 第35-36页 |
| ·其他试剂 | 第36-37页 |
| 3 试验方法 | 第37-42页 |
| ·WSSV基因组提取 | 第37页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第37页 |
| ·DNA电泳 | 第37页 |
| ·目的片段的割胶回收 | 第37-38页 |
| ·DNA片段与T载体连接 | 第38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·连接产物转化 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第39页 |
| ·测序 | 第39页 |
| ·重组克隆质粒和表达载体酶切 | 第39页 |
| ·目的片段与表达载体连接 | 第39-40页 |
| ·连接产物转化表达宿主菌 | 第40页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第40页 |
| ·阳性表达子的诱导表达 | 第40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第40页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第40-41页 |
| ·表达产物的纯化 | 第41-42页 |
| 4 试验结果 | 第42-44页 |
| ·VP28基因的克隆 | 第42页 |
| ·VP28核苷酸序列分析 | 第42-44页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE和Western blot检测和纯化分析 | 第44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| ·VP28基因克隆 | 第44-45页 |
| ·VP28基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第45-46页 |
| 第四章 抗重组VP28蛋白的单克隆抗体制备及鉴定 | 第46-54页 |
| 1 试验材料 | 第46-47页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·主要化学试剂的配制 | 第46-47页 |
| 2 试验方法 | 第47-51页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第47-50页 |
| ·单克隆抗体特异性的检测 | 第50-51页 |
| 3 试验结果 | 第51-52页 |
| ·VP28包被浓度确定及免疫血清效价测定 | 第51页 |
| ·单抗的免疫胶体金观察 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 抗重组VP28蛋白单克隆抗体对WSSV的检测 | 第54-60页 |
| 1 试验材料 | 第54页 |
| ·病毒 | 第54页 |
| ·抗重组VP28蛋白单克隆抗体 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·其他材料 | 第54页 |
| 2 试验方法 | 第54-56页 |
| ·Dot blotting | 第54-55页 |
| ·抗重组VP28蛋白单克隆抗体的特异性检测 | 第55页 |
| ·抗重组VP28蛋白单克隆抗体的敏感性检测 | 第55页 |
| ·竞争性PCR检测 | 第55-56页 |
| 3 试验结果 | 第56-58页 |
| ·抗重组VP28蛋白单克隆抗体的特异性检测 | 第56-57页 |
| ·抗重组VP28蛋白单克隆抗体的敏感性检测 | 第57页 |
| ·竞争性PCR检测 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录一 pUCm-T Vevtor | 第67-68页 |
| 附录二 pET-30a(+)Vevtor | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的与学位论文相关的文章 | 第69页 |
