| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩写词表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-23页 |
| 1.1 PGRN分子概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 PGRN分子的发现及其分布 | 第15页 |
| 1.1.2 PGRN分子的生物学功能 | 第15-17页 |
| 1.2 DYRK1A的分子结构、基因定位及细胞分布 | 第17-18页 |
| 1.2.1 DYRK1A的分子结构及基因定位 | 第17页 |
| 1.2.2 DYRK1A的细胞定位及其在组织中的分布 | 第17-18页 |
| 1.3 DYRK1A的功能研究现状 | 第18-20页 |
| 1.3.1 DYRK1A的分子机制及生理功能 | 第18页 |
| 1.3.2 DYRK1A在神经病变中的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.3 DYRK1A在肿瘤形成中的作用 | 第19-20页 |
| 1.3.4 DYRK1A在其他疾病中的作用研究 | 第20页 |
| 1.4 课题研究意义 | 第20页 |
| 1.5 课题技术路线 | 第20-23页 |
| 1.5.1 PGRN与DYRK1A相互作用的验证 | 第21页 |
| 1.5.2 功能探索 | 第21-23页 |
| 第二章 PGRN与DYRK1A相互作用的验证 | 第23-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-32页 |
| 2.1.1 实验菌株细胞和载体 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第27-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-45页 |
| 2.2.1 相关载体的构建 | 第32-40页 |
| 2.2.2 酵母双杂交验证PGRN与DYRK1A的相互作用 | 第40-41页 |
| 2.2.3 酵母双杂交探究PGRN与DYRK1A相互作用的位点 | 第41页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀检测PGRN和DYRK1A在哺乳动物细胞中的相互作用 | 第41-43页 |
| 2.2.5 GST-pull down检测PGRN和DYRK1A蛋白在体外的相互作用 | 第43-44页 |
| 2.2.6 激光共聚焦探究PGRN与DYRK1A在CHO细胞中的共定位 | 第44-45页 |
| 2.3 实验结果 | 第45-53页 |
| 2.3.1 相关载体的构建 | 第45-46页 |
| 2.3.2 酵母双杂交验证PGRN与DYRK1A的相互作用 | 第46页 |
| 2.3.3 酵母双杂交探究PGRN与DYRK1A相互作用的位点 | 第46-48页 |
| 2.3.4 免疫共沉淀鉴定PGRN和DYRK1A在哺乳动物细胞中的相互作用 | 第48-49页 |
| 2.3.5 GST-pull down检测PGRN和DYRK1A蛋白在体外的相互作用 | 第49-51页 |
| 2.3.6 激光共聚焦显示的PGRN与DYRK1A在CHO细胞中的共定位 | 第51-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 PGRN与DYRK1A相互作用影响细胞分化与增殖的研究 | 第55-77页 |
| 3.1 实验材料 | 第56-59页 |
| 3.1.1 实验细胞菌株和载体 | 第56页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第56页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第56-57页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第57-59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-67页 |
| 3.2.1 过表达PGRN与DYRK1A并观察其对SH-SY5Y细胞分化的影响 | 第59页 |
| 3.2.2 MTT法检测PGRN与DYRK1A相互作用对HEK293细胞增殖的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.3 Real-TimePCR检测相关基因转录水平变化 | 第60-62页 |
| 3.2.4 Westen Blot检测细胞内相关蛋白的含量变化 | 第62-63页 |
| 3.2.5 Real-Time PCR检测不同细胞中内源DYRK1A表达水平差异 | 第63页 |
| 3.2.6 建立DYRK1A单基因敲除的细胞系 | 第63-67页 |
| 3.3 实验结果 | 第67-73页 |
| 3.3.1 PGRN与DYRK1A对SH-SY5Y细胞分化的影响 | 第67-68页 |
| 3.3.2 PGRN与DYRK1A对HEK293细胞增殖的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.3 PGRN与DYRK1A相互作用对细胞增殖及分化影响的分子机制 | 第69-72页 |
| 3.3.4 不同细胞中DYRK1A的表达水平 | 第72页 |
| 3.3.5 DYRK1A基因敲除的细胞系的检测 | 第72-73页 |
| 3.4 讨论 | 第73-77页 |
| 第四章 总结 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第93页 |
