| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 细胞衰老 | 第12-17页 |
| 1.1.1 细胞衰老的特征 | 第12-13页 |
| 1.1.2 细胞衰老相关调控机制 | 第13-15页 |
| 1.1.3 细胞衰老的分类 | 第15-17页 |
| 1.1.4 细胞衰老的影响 | 第17页 |
| 1.2 IGF-1/胰岛素信号通路 | 第17-20页 |
| 1.2.1 胰岛素样生长因子-1 | 第17-18页 |
| 1.2.2 IGF-1生物学调控因素 | 第18页 |
| 1.2.3 IGF-1信号通路与长寿 | 第18-19页 |
| 1.2.4 IGF-1信号通路与细胞衰老 | 第19页 |
| 1.2.5 IGF-1/PI3K/Akt | 第19-20页 |
| 1.3 实验目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第22页 |
| 2.2 大鼠软骨细胞的培养与处理 | 第22-24页 |
| 2.2.1 大鼠软骨细胞的培养 | 第22-23页 |
| 2.2.2 大鼠软骨细胞计数与传代 | 第23页 |
| 2.2.3 大鼠软骨细胞分组 | 第23-24页 |
| 2.3 软骨细胞鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.1 软骨细胞形态观察 | 第24页 |
| 2.3.2 软骨细胞蛋白多糖鉴定 | 第24页 |
| 2.3.3 软骨细胞II型胶原免疫荧光鉴定 | 第24-25页 |
| 2.4 软骨细胞衰老相关β半乳糖苷酶活性染色 | 第25页 |
| 2.4.1 工作液配制 | 第25页 |
| 2.4.2 染色 | 第25页 |
| 2.4.3 计数 | 第25页 |
| 2.5 总RNA的提取与目的基因表达测定 | 第25-28页 |
| 2.5.1 引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.5.2 细胞总RNA提取 | 第26页 |
| 2.5.3 反转录反应 | 第26-27页 |
| 2.5.4 实时荧光定量PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.6 目的蛋白含量的测定 | 第28-30页 |
| 2.6.1 细胞中总蛋白的提取 | 第28页 |
| 2.6.2 蛋白浓度浓度测定 | 第28页 |
| 2.6.3 蛋白样品处理 | 第28页 |
| 2.6.4 Western-blot检测目的蛋白 | 第28-30页 |
| 2.7 数据统计与分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-43页 |
| 3.1 软骨细胞培养及鉴定 | 第31-33页 |
| 3.1.1 软骨细胞形态观察 | 第31页 |
| 3.1.2 甲苯胺兰染色 | 第31-32页 |
| 3.1.3 II型胶原免疫荧光染色 | 第32-33页 |
| 3.2 软骨细胞衰老β-半乳糖苷酶染色结果 | 第33-36页 |
| 3.2.1 第3代软骨细胞衰老相关β-半乳糖苷酶染色结果 | 第33-35页 |
| 3.2.2 第5代软骨细胞衰老相关β-半乳糖苷酶染色结果 | 第35-36页 |
| 3.3 IGF-1对软骨细胞Akt表达的影响 | 第36-39页 |
| 3.3.1 IGF-1对软骨细胞Akt基因水平表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.2 IGF-1对软骨细胞Akt蛋白水平表达的影响 | 第37-39页 |
| 3.4 IGF-1对软骨细胞p53-p21信号通路的影响 | 第39-43页 |
| 3.4.1 IGF-1对软骨细胞p53表达的影响 | 第39-41页 |
| 3.4.2 IGF-1对软骨细胞p21表达的影响 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 4.1 IGF-1对软骨细胞衰老相关β-半乳糖苷酶活性的影响 | 第43-44页 |
| 4.2 IGF-1对软骨细胞Akt表达的影响 | 第44-45页 |
| 4.3 IGF-1对软骨细胞p53表达的影响 | 第45-46页 |
| 4.4 IGF-1对软骨细胞p21表达的影响 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
