| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-26页 |
| 1.1 植物细胞色素P450概述 | 第13-14页 |
| 1.2 花色苷的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 色素种类与果实着色 | 第14页 |
| 1.2.2 花色苷的结构及理化性质 | 第14-15页 |
| 1.2.3 花色苷的生物合成途径 | 第15-17页 |
| 1.2.4 花色苷生物合成相关基因 | 第17-20页 |
| 1.3 F3'5'H基因的研究现状 | 第20-22页 |
| 1.3.1 F3'5'H基因的作用机理 | 第20页 |
| 1.3.2 F3'5'H基因的分离 | 第20-21页 |
| 1.3.3 F3'5'H同源基因的结构分析 | 第21页 |
| 1.3.4 F3'5'H同源基因的表达特性 | 第21-22页 |
| 1.3.5 F3'5'H的底物特异性 | 第22页 |
| 1.4 黑穗醋栗花色苷研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4.1 黑穗醋栗花色苷的分离鉴定 | 第23页 |
| 1.4.2 黑穗醋栗花色苷的生物学活性分析 | 第23页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.6 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.7 研究技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-37页 |
| 2.1 试验材料 | 第26页 |
| 2.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.4 黑穗醋栗类黄酮-3',5'-羟化酶基因的克隆 | 第27-30页 |
| 2.4.1 黑穗醋栗RNA的提取 | 第27页 |
| 2.4.2 RNA检测 | 第27-28页 |
| 2.4.3 逆转录 | 第28页 |
| 2.4.4 PCR引物设计 | 第28页 |
| 2.4.5 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.4.6 PCR产物琼脂糖凝胶回收 | 第29页 |
| 2.4.7 目的基因片段与克隆载体的连接 | 第29页 |
| 2.4.8 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29-30页 |
| 2.4.9 菌落PCR鉴定 | 第30页 |
| 2.4.10 生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.5 黑穗醋栗类黄酮-3',5'-羟化酶基因时空特异性表达 | 第30-34页 |
| 2.5.1 黑穗醋栗总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.5.2 逆转录 | 第30-31页 |
| 2.5.3 引物设计 | 第31-32页 |
| 2.5.4 黑穗醋栗F3'5'H基因实时荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 2.5.5 数据分析 | 第33页 |
| 2.5.6 黑穗醋栗中花色苷的定性与定量 | 第33-34页 |
| 2.6 黑穗醋栗类黄酮-3',5'-羟化酶基因的原核表达 | 第34-37页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第34页 |
| 2.6.2 目的基因的扩增 | 第34页 |
| 2.6.3 表达载体pET28b-F3'5'H的构建 | 第34-35页 |
| 2.6.4 重组蛋白pET28b-F3'5'H的诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.6.5 F3'5'H重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| 2.6.6 重组蛋白浓度的测定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-56页 |
| 3.1 黑穗醋栗类黄酮-3',5'-羟化酶基因的克隆 | 第37-45页 |
| 3.1.1 黑穗醋栗RNA的提取 | 第37页 |
| 3.1.2 黑穗醋栗F3'5'H基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.1.3 菌落PCR检测 | 第38页 |
| 3.1.4 测序结果 | 第38-39页 |
| 3.1.5 基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第39-45页 |
| 3.2 黑穗醋栗类黄酮-3',5'-羟化酶基因时空表达特异性分析 | 第45-52页 |
| 3.2.1 总RNA样品检测 | 第45-46页 |
| 3.2.2 基因特异引物的PCR验证 | 第46页 |
| 3.2.3 黑穗醋栗F3'5'H基因在不同组织及果实成熟阶段的表达 | 第46-48页 |
| 3.2.4 黑穗醋栗发育过程中花色苷的定性定量分析 | 第48-52页 |
| 3.3 黑穗醋栗类黄酮-3',5'-羟化酶基因的原核表达 | 第52-56页 |
| 3.3.1 pET28b-F3'5'H载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.2 表达蛋白的可溶性分析 | 第53-54页 |
| 3.3.3 重组蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.4 蛋白浓度的测定 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 总RNA的提取方法 | 第56页 |
| 4.2 F3'5'H基因的功能 | 第56-57页 |
| 4.3 F3'5'H基因的特异性表达 | 第57-58页 |
| 4.4 F3'5'H基因序列原核表达 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
