| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-32页 |
| 1.1 蜜蜂囊状幼虫病的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 中华蜜蜂囊状幼虫病的研究现状 | 第15-21页 |
| 1.2.1 中华蜜蜂囊状幼虫病的病原 | 第15-16页 |
| 1.2.2 中华蜜蜂囊状幼虫病的流行规律 | 第16-17页 |
| 1.2.3 中华蜜蜂囊状幼虫病的传播途径 | 第17-18页 |
| 1.2.4 中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断方法 | 第18-20页 |
| 1.2.5 中华蜜蜂囊状幼虫病的防治措施 | 第20-21页 |
| 1.3 昆虫杆状病毒表达系统 | 第21-23页 |
| 1.3.1 昆虫杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的原理 | 第21-22页 |
| 1.3.2 昆虫杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 酵母双杂交技术 | 第23-24页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术的原理 | 第23页 |
| 1.4.2 酵母双杂交技术的应用 | 第23-24页 |
| 1.5 昆虫细胞培养及其应用 | 第24-27页 |
| 1.5.1 昆虫细胞培养的概况 | 第24-25页 |
| 1.5.2 昆虫培养细胞的应用 | 第25-26页 |
| 1.5.3 蜜蜂组织的细胞培养 | 第26-27页 |
| 1.6 正单链RNA病毒的复制机制 | 第27-28页 |
| 1.7 RNA干扰及其应用 | 第28-30页 |
| 1.7.1 RNA干扰的原理 | 第28-29页 |
| 1.7.2 RNA干扰的应用 | 第29-30页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 中华蜜蜂囊状幼虫病病毒福州分离物(CSBV-FZ)全基因组序列分析 | 第32-44页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.1 病毒 | 第32页 |
| 2.1.2 菌株和克隆载体 | 第32页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第33页 |
| 2.2.2 CSBV-FZ病毒的纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.3 CSBV-FZ总RNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.4 RT-PCR反应 | 第34-35页 |
| 2.2.5 CSBV-FZ目的基因的回收和纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.6 PCR扩增产物的克隆 | 第36页 |
| 2.2.7 连接产物转化至大肠杆菌DH5α菌株 | 第36页 |
| 2.2.8 阳性克隆的筛选鉴定与质粒的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.9 序列的拼接和分析 | 第37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.3.1 CSBV-FZ病毒粒体的形态特征 | 第37-38页 |
| 2.3.2 CSBV-FZ各段目的基因的扩增 | 第38页 |
| 2.3.3 CSBV-FZ全基因组序列特征分析 | 第38-39页 |
| 2.3.4 CSBV-FZ与其他SBV分离物同源性分析 | 第39-40页 |
| 2.3.5 系统进化分析 | 第40-41页 |
| 2.3.6 CSBV-FZ编码蛋白跨膜区分析 | 第41-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3 中华蜜蜂囊状幼虫病病毒结构蛋白VP1与非结构蛋白RdRp的互作 | 第44-63页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.1 病毒和细胞 | 第44页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第44-45页 |
| 3.1.3 试剂 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-54页 |
| 3.2.1 结构蛋白VP1和非结构蛋白RdRp抗体制备 | 第45-50页 |
| 3.2.2 VP1蛋白和RdRp蛋白在Sf9细胞中的表达 | 第50-52页 |
| 3.2.3 酵母双杂交技术验证VP1蛋白与RdRp蛋白的互作 | 第52-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-61页 |
| 3.3.1 结构蛋白VP1和非结构蛋白RdRp抗体制备与检测 | 第54-57页 |
| 3.3.2 VP1蛋白和RdRp蛋白在Sf9细胞中的表达 | 第57-59页 |
| 3.3.3 酵母双杂交技术验证VP1蛋白与RdRp蛋白的互作 | 第59-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 4 中华蜜蜂囊状幼虫病病毒在寄主体内的复制 | 第63-78页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第63-64页 |
| 4.1.1 中华蜜蜂蜂群 | 第63页 |
| 4.1.2 病毒和细胞 | 第63页 |
| 4.1.3 试剂与抗体 | 第63-64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-70页 |
| 4.2.1 中华蜜蜂胚胎原代细胞的培养 | 第64页 |
| 4.2.2 VP1蛋白和RdRp蛋白在培养细胞中的表达 | 第64-65页 |
| 4.2.3 电镜观察CSBV在培养细胞内的分布 | 第65-67页 |
| 4.2.4 CSBV在培养细胞中的增殖 | 第67-70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-76页 |
| 4.3.1 中华蜜蜂胚胎原代细胞的培养 | 第70-71页 |
| 4.3.2 VP1蛋白和RdRp蛋白在培养细胞中的表达 | 第71-72页 |
| 4.3.3 电镜观察CSBV在培养细胞内的分布 | 第72-73页 |
| 4.3.4 CSBV在培养细胞中的复制增殖 | 第73-76页 |
| 4.4 讨论 | 第76-78页 |
| 5 RNAi技术抑制中华蜜蜂囊状幼虫病病毒的复制 | 第78-95页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第78-79页 |
| 5.1.1 菌株和载体 | 第78页 |
| 5.1.2 CSBV病毒粗提液 | 第78页 |
| 5.1.3 试剂 | 第78-79页 |
| 5.2 实验方法 | 第79-85页 |
| 5.2.1 人工实验室饲养中华蜜蜂幼虫 | 第79-80页 |
| 5.2.2 中华蜜蜂幼虫人工接种CSBV病毒 | 第80页 |
| 5.2.3 CSBV同源的特异dsRNA对CSBV在幼虫体内复制的影响 | 第80-82页 |
| 5.2.4 dsRdRp对中华蜜蜂囊状幼虫病的治疗效果 | 第82-85页 |
| 5.3 结果与分析 | 第85-93页 |
| 5.3.1 人工实验室饲养中华蜜蜂幼虫 | 第85-86页 |
| 5.3.2 实验室接种CSBV病毒给中华蜜蜂幼虫 | 第86-87页 |
| 5.3.3 CSBV同源的特异dsRNA对CSBV在幼虫体内复制的影响 | 第87-89页 |
| 5.3.4 dsRdRp对中华蜜蜂囊状幼虫病的防治效果 | 第89-93页 |
| 5.4 讨论 | 第93-95页 |
| 6 主要结论与展望 | 第95-97页 |
| 6.1 主要结论 | 第95-96页 |
| 6.2 创新点与展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简介 | 第115页 |
| 博士期间发表的论文 | 第115页 |
| 发明专利 | 第115页 |
