| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-18页 |
| 一 金属蛋白酶的研究进展 | 第12-14页 |
| 二 M12家族金属蛋白酶的简介 | 第14-17页 |
| 三 微生物中M12家族金属蛋白酶的介绍 | 第17页 |
| 四 本论文研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第一章 Myroides sp. CSLB8培养液中myroilysin蛋白的分离纯化及晶体学的研究 | 第18-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 菌种 | 第18页 |
| 1.1.2 培养基 | 第18页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第18-19页 |
| 1.2 实验方法 | 第19-20页 |
| 1.2.1 粗酶液的制备 | 第19页 |
| 1.2.2 阴离子交换柱层析 | 第19页 |
| 1.2.3 凝胶过滤层析 | 第19页 |
| 1.2.4 蛋白结晶条件的筛选 | 第19-20页 |
| 1.2.5 蛋白结晶条件的重复和优化 | 第20页 |
| 1.2.6 蛋白晶体的冻存 | 第20页 |
| 1.2.7 蛋白晶体的X-射线衍射 | 第20页 |
| 1.3 实验结果与分析 | 第20-23页 |
| 1.3.1 粗酶液制备结果 | 第20-21页 |
| 1.3.2 阴离子交换层析分离纯化结果 | 第21-22页 |
| 1.3.3 凝胶过滤层析分离纯化结果 | 第22页 |
| 1.3.4 myroilysin蛋白晶体及衍射结果 | 第22-23页 |
| 1.4 讨论 | 第23页 |
| 1.5 本章小结 | 第23-24页 |
| 第二章 myroilysin基因的异源表达,以及myroilysin酶原的晶体学研究 | 第24-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 质粒和宿主菌 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基 | 第24页 |
| 2.1.3 CSLB8基因组DNA | 第24页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 myroilysin前体蛋白的序列分析 | 第25页 |
| 2.2.2 Myroides sp. CSLB8基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.3 pET24b_myroilysin和pET24b_pro-myroilysin重组表达质粒的构建、蛋白的表达及纯化 | 第25-29页 |
| 2.2.4 pro-myroilysin蛋白结晶条件的筛选 | 第29页 |
| 2.2.5 pro-myroilysin蛋白结晶条件的重复和优化 | 第29页 |
| 2.2.6 pro-myroilysin蛋白晶体的冻存 | 第29页 |
| 2.2.7 pro-myroilysin蛋白晶体的X-射线衍射及衍射数据的处理 | 第29页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第29-46页 |
| 2.3.1 myroilysin前体蛋白的序列分析 | 第29-30页 |
| 2.3.2 pET24b_myroilysin重组表达质粒的构建及其蛋白的表达 | 第30-31页 |
| 2.3.3 pET24b_pro-myroilysin重组表达质粒的构建,以及蛋白的表达与纯化 | 第31-35页 |
| 2.3.4 pro-myroilysin蛋白晶体及衍射结果 | 第35页 |
| 2.3.5 pro-myroilysin蛋白晶体结构的解析 | 第35-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 myroilysin突变体基因、MBP_myroilysin基因和MBP_ Y171F基因的异源表达、蛋白的纯化以及蛋白酶活性的测定 | 第52-72页 |
| 3.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.1.1 质粒和宿主菌 | 第52页 |
| 3.1.2 培养基 | 第52页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第52页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第52-53页 |
| 3.2 试验方法 | 第53-58页 |
| 3.2.1 pET24b E104A和pET24b_Y171F重组表达质粒的构建,蛋白的表达、纯化及E104A蛋白酶活性的测定 | 第53-56页 |
| 3.2.2 pET28a MBP myroilysin和pET28a_MBP_Y171F重组表达质粒的构建、融合蛋白的表达、纯化以及蛋白酶活性的测定 | 第56-58页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第58-69页 |
| 3.3.1 pET24b_E104A重组表达质粒的构建,以及蛋白的表达、纯化 | 第58-61页 |
| 3.3.2 pET24b_Y171F重组表达质粒的构建以及蛋白的表达 | 第61-63页 |
| 3.3.3 pET28a_MBP_myroilysin重组表达质粒的构建,以及融合蛋白的表达、纯化 | 第63-66页 |
| 3.3.4 pET28a_MBP_Y171F重组表达质粒的构建,以及融合蛋白的表达、纯化 | 第66-68页 |
| 3.3.5 野生型myroilysin蛋白、E104A突变体蛋白,以及MBP_myroilysin和MBP_Y171F融合蛋白的蛋白酶活性的测定结果 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 3.5 本章小结 | 第70-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 研究的主要创新点 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附录 | 第80-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
