| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-11页 |
| Abstract | 第11-17页 |
| 参考文献 | 第17-20页 |
| 英文缩略词表 | 第20-26页 |
| 1 绪论 | 第26-32页 |
| 1.1 骨肉瘤的现状 | 第26-27页 |
| 1.2 PARK2在恶性肿瘤中的研究现状 | 第27-28页 |
| 1.3 科学假设—PARK2参与调节了骨肉瘤在生长与转移 | 第28页 |
| 1.4 参考文献 | 第28-32页 |
| 2 第一章 PARK2在人骨肉瘤组织标本和细胞系中的表达 | 第32-48页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第33-35页 |
| 2.2.1 主要实验材料和试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-39页 |
| 2.3.1 免疫组化染色 | 第35-36页 |
| 2.3.2 细胞培养与冻存 | 第36-37页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR检测 | 第37-39页 |
| 2.3.4 统计学分析 | 第39页 |
| 2.4 实验结果 | 第39-42页 |
| 2.4.1 PARK2蛋白在骨肉瘤组织中的表达 | 第39-41页 |
| 2.4.2 PARK2基因在正常成骨细胞hFOB1.19和人骨肉瘤细胞系中mRNA的表达 | 第41-42页 |
| 2.5 讨论 | 第42-44页 |
| 2.6 结论 | 第44页 |
| 2.7 参考文献 | 第44-48页 |
| 3 第二章 PARK2基因在体外和体内对人骨肉瘤生物学行为的影响 | 第48-82页 |
| 3.1 引言 | 第48-49页 |
| 3.2 材料及仪器 | 第49-54页 |
| 3.2.1 细胞系 | 第49页 |
| 3.2.2 PARK2基因表达质粒 | 第49页 |
| 3.2.3 实验动物 | 第49页 |
| 3.2.4 主要实验材料及试剂 | 第49-51页 |
| 3.2.5 主要仪器 | 第51-52页 |
| 3.2.6 相关溶液的配制 | 第52-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-61页 |
| 3.3.1 人骨肉瘤细胞的培养 | 第54页 |
| 3.3.2 构建过PARK2过表达(overexpression)骨肉瘤细胞系 | 第54-55页 |
| 3.3.3 免疫荧光染色 | 第55页 |
| 3.3.4 Western Blot蛋白检测 | 第55-57页 |
| 3.3.5 细胞增殖检测 | 第57页 |
| 3.3.6 细胞克隆实验 | 第57页 |
| 3.3.7 Ki67免疫荧光染色实验 | 第57-58页 |
| 3.3.8 周期实验 | 第58页 |
| 3.3.9 迁移、侵袭实验 | 第58-59页 |
| 3.3.10 细胞凋亡实验 | 第59页 |
| 3.3.11 体内成瘤与转移实验 | 第59-60页 |
| 3.3.12 肿瘤标本脱钙、包埋及切片 | 第60页 |
| 3.3.13 HE染色 | 第60-61页 |
| 3.3.14 免疫组化 | 第61页 |
| 3.3.15 统计学分析 | 第61页 |
| 3.4 实验结果 | 第61-75页 |
| 3.4.1 在骨肉瘤HOS与U20S细胞系中成功过表达PARK2 | 第61-63页 |
| 3.4.2 PARK2基因过表达对骨肉瘤细胞增殖的影响 | 第63-66页 |
| 3.4.3 PARK2基因过表达对骨肉瘤细胞迁移与侵袭能力的影响 | 第66-69页 |
| 3.4.4 PARK2基因过表达对骨肉瘤细胞凋亡的影响 | 第69-71页 |
| 3.4.5 PARK2基因过表达对骨肉瘤细胞体内成瘤和肺转移的影响 | 第71-75页 |
| 3.5 讨论 | 第75-78页 |
| 3.6 结论 | 第78页 |
| 3.7 参考文献 | 第78-82页 |
| 4 第三章 过表达PARK2通过JAK2/STAT3/VEGF信号通路抑制骨肉瘤血管形成 | 第82-104页 |
| 4.1 引言 | 第82-83页 |
| 4.2 材料及仪器 | 第83-86页 |
| 4.2.1 细胞系、PARK2基因表达质粒和实验动物 | 第83页 |
| 4.2.2 主要实验材料及试剂 | 第83-85页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第85-86页 |
| 4.3 实验方法 | 第86-88页 |
| 4.3.1 人骨肉瘤细胞的培养 | 第86页 |
| 4.3.2 构建PARK2过表达骨肉瘤细胞系 | 第86页 |
| 4.3.3 Western Blot蛋白检测 | 第86页 |
| 4.3.4 免疫荧光检测 | 第86页 |
| 4.3.5 小管形成实验 | 第86-87页 |
| 4.3.6 体内血管形成实验 | 第87页 |
| 4.3.7 血红蛋白检测 | 第87页 |
| 4.3.8 冰冻切片 | 第87-88页 |
| 4.3.9 H&E染色 | 第88页 |
| 4.3.10 切片免疫荧光染色 | 第88页 |
| 4.3.11 统计学分析 | 第88页 |
| 4.4 结果 | 第88-97页 |
| 4.4.1 PARK2过表达下调了JAK2/STAT3/VEGF信号通路 | 第88-92页 |
| 4.4.2 PARK2过表达抑制了骨肉瘤细胞体外小管形成 | 第92-94页 |
| 4.4.3 PARK2过表达抑制了骨肉瘤细胞体内血管形成 | 第94-97页 |
| 4.5 讨论 | 第97-98页 |
| 4.6 结论 | 第98-99页 |
| 4.7 参考文献 | 第99-104页 |
| 综述 | 第104-131页 |
| 参考文献 | 第117-131页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第131页 |
