| 全文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 单核细胞增多性李斯特菌毒力因子研究进展 | 第14-23页 |
| 1.单核细胞增多性李斯特菌的一般特性 | 第14-15页 |
| 3.发病特征及病理变化 | 第15-16页 |
| 4.不同血清型李斯特菌分布及危害 | 第16-17页 |
| 5.单增李斯特菌的致病机制及主要毒力因子 | 第17-22页 |
| 5.1 环境应激相关毒力因子 | 第17页 |
| 5.2 粘附侵袭相关毒力因子 | 第17-21页 |
| 5.3 逃逸吞噬体相关因 | 第21-22页 |
| 5.4 增殖与迁移相关因子 | 第22页 |
| 5.5 毒力基因表达调控相关因子 | 第22页 |
| 6 总结 | 第22-23页 |
| 第二章 试验内容 | 第23-63页 |
| 试验一 单增李斯特菌lmo0331基因克隆、表达及生物信息学分析 | 第23-35页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-27页 |
| 2.1 引物的设计合成 | 第25页 |
| 2.2 lmo0331基因片段的克隆 | 第25页 |
| 2.3 lmo0331基因及其编码蛋白质生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.4 重组表达质粒的构建 | 第26页 |
| 2.5 目的基因的诱导表达 | 第26页 |
| 2.6 Western-blotting鉴定重组蛋白 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-33页 |
| 3.1 lmo0331基因PCR扩增及克隆 | 第27页 |
| 3.2 lmo0331核苷酸序列同源性比对 | 第27-28页 |
| 3.3 lmo0331编码的氨基酸序列比较结果 | 第28-29页 |
| 3.4 lmo0331基因序列的系统进化分析 | 第29页 |
| 3.5 lmo0331基因编码蛋白的理化性质分析 | 第29-30页 |
| 3.3 Lmo0331信号肽和蛋白跨膜结构分析 | 第30页 |
| 3.4 Lmo0331蛋白的结构预测 | 第30-32页 |
| 3.8 pE3T2a-0331重组表达质粒的构建和鉴定 | 第32页 |
| 3.9 重组质粒pET32a-0331E.coliBL21(DE3)中的表达产物SDS-PAGE分析 | 第32-33页 |
| 3.10 Lmo0331重组蛋白Western-blotting鉴定 | 第33页 |
| 4.讨论 | 第33-35页 |
| 试验二 LM90SB2△lmo0331缺失株的构建 | 第35-46页 |
| 1 材料 | 第36-38页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第36页 |
| 1.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 1.4 引物 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-40页 |
| 2.1 lmo0331基因上下游同源臂扩增 | 第38页 |
| 2.2 SOE-PCR扩增△lmo0331基因 | 第38页 |
| 2.3 融合条带△lmo0331克隆和测序 | 第38页 |
| 2.4 重组质粒pKSV7-△lmo0331构建 | 第38-39页 |
| 2.5 LM90SB2菌株感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 2.6 重组质粒pKSV7-△lmo0331电转化入LM90SB | 第39页 |
| 2.7 LM90SB2△lmo0331缺失突变株的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| 2.8 LM90SB2△lmo0331缺失株遗传稳定性鉴定及生长特性 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-45页 |
| 3.1 lmo0331基因上下游同源臂扩增和SOE-PCR结果 | 第40-41页 |
| 3.2 重组质粒pMD19T-△lmo0331构建 | 第41页 |
| 3.3 重组质粒pKSV7-△lmo0331双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.4 电转化后阳性转化子的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.5 LM90SB2△lmo0331的筛选与鉴定 | 第43-44页 |
| 3.6 LM90SB2△lmo0331遗传稳定性鉴定 | 第44页 |
| 3.7 生长曲线测定 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 试验三 LM90SB2△lmo0331缺失株环境适应性研究 | 第46-56页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| 1.1 菌株 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| 2.1 生化特性的测定 | 第47-48页 |
| 2.2 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331不同温度下生长情况 | 第48页 |
| 2.3 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331不同pH值下生长情况 | 第48页 |
| 2.4 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331对NaCl耐受性的测定 | 第48页 |
| 2.5 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331不同EtOH浓度条件下的生长曲线测定 | 第48页 |
| 2.6 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331生物被膜形成能力的测定 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-54页 |
| 3.1 生化鉴定结果 | 第49页 |
| 3.2 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331不同温度下生长情况 | 第49-50页 |
| 3.3 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331不同pH值下生长情况 | 第50-51页 |
| 3.4 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331对NaCl耐受性的测定 | 第51-52页 |
| 3.5 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331不同EtOH浓度条件下的生长情况 | 第52-53页 |
| 3.6 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331生物被膜形成能力的测定结果 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 试验四 lmo0331基因缺失对LM90SB2毒力的影响 | 第56-63页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| 1.1 菌株、细胞和实验动物 | 第56-57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| 2.1 细胞培养 | 第57-58页 |
| 2.2 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331对细胞的粘附、侵袭和胞内增殖实验 | 第58页 |
| 2.3 LD50的测定 | 第58页 |
| 2.4 小鼠肝、脾、脑载菌量的测定 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-61页 |
| 3.1 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331对细胞的粘附、侵袭测定结果 | 第59页 |
| 3.2 LM90SB2和LM90SB2△lmo0331在细胞内的增殖测定结果 | 第59-60页 |
| 3.3 LD50的测定 | 第60页 |
| 3.4 小鼠肝脏、脾脏和脑载菌量的测定 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 全文结论 | 第63页 |
| 创新点 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第73页 |
