| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩写表 | 第9-14页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 生物固氮 | 第14页 |
| 1.2 联合固氮菌的研究 | 第14-16页 |
| 1.3 联合固氮菌的生物学功能 | 第16-19页 |
| 1.3.1 固氮作用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 促生作用 | 第17-18页 |
| 1.3.3 溶磷作用 | 第18页 |
| 1.3.4 微生态调节作用 | 第18-19页 |
| 1.3.5 生物防治作用 | 第19页 |
| 1.3.6 抗逆性作用 | 第19页 |
| 1.4 联合固氮菌在甘蔗内的侵染与定殖 | 第19-21页 |
| 1.5 联合固氮作用的影响因素 | 第21-22页 |
| 1.6 gfp标记在联合固氮中的应用 | 第22-23页 |
| 1.7 nifH基因的研究进展 | 第23页 |
| 1.8 本研究的内容及意义 | 第23-25页 |
| 1.9 技术路线 | 第25-26页 |
| 2 gfp标记固氮菌株DX120E | 第26-31页 |
| 2.1 材料和方法 | 第26页 |
| 2.1.1 供试菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂及抗生素 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 DX120E菌株中导入pPROBE-pTetr-TT质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.2 DX120E-gfp的荧光检测 | 第27页 |
| 2.2.3 gfp基因的PCR检测 | 第27页 |
| 2.2.4 质粒的稳定性评价 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-29页 |
| 2.3.1 DX120E的观察和荧光检测 | 第28页 |
| 2.3.2 菌株gfp的PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.3.3 质粒稳定性的检测 | 第29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 3 nifH基因的PCR扩增及不同时期nifH基因表达量分析 | 第31-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-32页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 3.1.2 供试菌株 | 第31页 |
| 3.1.3 主要试验试剂 | 第31页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 3.1.5 桶栽试验土壤 | 第32页 |
| 3.1.6 试验用桶 | 第32页 |
| 3.2 试验方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 制备接菌液 | 第32页 |
| 3.2.2 甘蔗种植及接菌处理 | 第32-33页 |
| 3.2.3 样品的采集及处理 | 第33页 |
| 3.2.4 DNA和RNA的提取 | 第33页 |
| 3.2.5 PCR扩增nifH基因 | 第33-34页 |
| 3.2.6 荧光显微镜观察DX120E在甘蔗中的定殖 | 第34页 |
| 3.2.7 nifH基因相对表达量分析 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 甘蔗根和叶片DNA的提取 | 第35页 |
| 3.3.2 DX120E在不同甘蔗根和叶片中的nifH检测 | 第35-37页 |
| 3.3.3 DX120E在甘蔗中定殖的显微镜观察 | 第37-38页 |
| 3.3.4 甘蔗茎和叶片RNA的提取质量 | 第38页 |
| 3.3.5 接菌处理对不同时期不同甘蔗品种nifH基因表达量的影响 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-42页 |
| 4 固氮菌接种对甘蔗农艺性状和氮代谢相关指标的影响 | 第42-50页 |
| 4.1 试验材料及处理 | 第42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 甘蔗株高的测定 | 第42页 |
| 4.2.2 甘蔗叶绿素含量的测定 | 第42页 |
| 4.2.3 不同品种甘蔗鲜重的测定 | 第42页 |
| 4.2.4 硝酸还原酶活性的测定 | 第42-43页 |
| 4.2.5 谷氨酰胺合成酶活性的测定 | 第43页 |
| 4.2.6 硝态氮含量的测定 | 第43页 |
| 4.2.7 数据分析 | 第43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-48页 |
| 4.3.1 接菌对不同甘蔗株高和叶绿素含量的影响 | 第43-44页 |
| 4.3.2 接菌对不同甘蔗叶绿素含量的影响 | 第44页 |
| 4.3.3 接菌对不同甘蔗地上和地下部分鲜重的影响 | 第44-45页 |
| 4.3.4 接菌对不同甘蔗地下部分鲜重的影响 | 第45页 |
| 4.3.5 接菌处理对不同甘蔗品种谷氨酰胺合成酶活性的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.6 接菌处理对三个甘蔗品种硝酸还原酶活性的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.7 接菌处理对不同甘蔗品种硝态氮含量的影响 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 4.5 小结 | 第49-50页 |
| 5 不同季节接菌对不同甘蔗品种nifH基因和蛋白表达的影响 | 第50-60页 |
| 5.1 试验材料 | 第50-51页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第50页 |
| 5.1.2 供试菌株 | 第50页 |
| 5.1.3 接菌处理 | 第50页 |
| 5.1.4 主要试验试剂 | 第50页 |
| 5.1.5 主要仪器设备 | 第50页 |
| 5.1.6 试剂配制方法 | 第50-51页 |
| 5.2 试验方法 | 第51-53页 |
| 5.2.1 样品的采集及处理 | 第51页 |
| 5.2.2 DNA和RNA的提取 | 第51页 |
| 5.2.3 nifH基因的PCR扩增 | 第51页 |
| 5.2.4 DX120E在甘蔗中的定殖观察 | 第51页 |
| 5.2.5 蛋白质的提取 | 第51-52页 |
| 5.2.6 nifH蛋白的Western blot检测 | 第52页 |
| 5.2.7 数据分析 | 第52-53页 |
| 5.3 结果与分析 | 第53-57页 |
| 5.3.1 PCR扩增nifH基因 | 第53页 |
| 5.3.2 不同种植时期不同甘蔗品种nifH基因的表达量 | 第53-55页 |
| 5.3.3 叶片nifH蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第55页 |
| 5.3.4 叶片内生固氮菌nifH蛋白的检测 | 第55-57页 |
| 5.3.5 甘蔗成熟期nifH蛋白的相对表达量 | 第57页 |
| 5.4 讨论 | 第57-60页 |
| 6 结论 | 第60-62页 |
| 6.1 全文总结 | 第60-61页 |
| 6.2 论文创新点 | 第61页 |
| 6.3 问题与展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
