| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 L-鸟氨酸的概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 L-鸟氨酸基本性质 | 第10页 |
| 1.1.2 L-鸟氨酸的应用 | 第10-12页 |
| 1.1.3 L-鸟氨酸的生产方法 | 第12-13页 |
| 1.2 微生物发酵法生产L-鸟氨酸现状 | 第13-14页 |
| 1.3 谷氨酸棒状杆菌中鸟氨酸代谢途径及其调控机制 | 第14-18页 |
| 1.3.1 谷氨酸棒状杆菌中L-鸟氨酸的生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.3.2 谷氨酸棒状杆菌中L-鸟氨酸合成的代谢改造策略 | 第16-17页 |
| 1.3.3 argF在鸟氨酸合成途径中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4 常用的控制基因表达手段 | 第18-20页 |
| 1.4.1 基因敲除法控制基因表达 | 第18页 |
| 1.4.2 翻译水平控制基因表达手段 | 第18-19页 |
| 1.4.3 转录水平控制基因表达手段 | 第19-20页 |
| 1.5 本论文的研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 敲除argF提高谷氨酸棒状杆菌L-鸟氨酸产量 | 第22-37页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 实验质粒和菌株 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验试剂与仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 常用培养基及培养条件 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.3.1 分子实验操作 | 第25-28页 |
| 2.3.2 基因敲除菌株的构建 | 第28-30页 |
| 2.3.3 菌体培养和发酵 | 第30-31页 |
| 2.3.4 生物量测定 | 第31页 |
| 2.3.5 鸟氨酸定量检测 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果分析 | 第32-36页 |
| 2.4.1 鸟氨酸标准曲线的建立 | 第32页 |
| 2.4.2 谷氨酸棒状杆菌中argF基因敲除 | 第32-34页 |
| 2.4.3 敲除argF对鸟氨酸产量的影响 | 第34页 |
| 2.4.4 敲除argF对细胞生长的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.5 添加精氨酸对发酵参数的影响 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 从翻译水平弱化argF对C.glu L-鸟氨酸产量的影响 | 第37-44页 |
| 3.1 引言 | 第37-38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 实验质粒和菌种 | 第38页 |
| 3.2.2 实验试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.3.1 分子实验操作 | 第39页 |
| 3.3.2 菌株构建 | 第39-40页 |
| 3.3.3 菌体培养和发酵 | 第40页 |
| 3.3.4 生物量测定 | 第40页 |
| 3.3.5 鸟氨酸定量检测 | 第40页 |
| 3.4 实验结果分析 | 第40-43页 |
| 3.4.1 菌株构建 | 第40-41页 |
| 3.4.2 添加降解标签弱化argF | 第41-42页 |
| 3.4.3 优化RBS位点弱化argF | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 从转录水平弱化argF对C.glu L-鸟氨酸产量的影响 | 第44-58页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-46页 |
| 4.2.1 实验质粒和菌种 | 第44-46页 |
| 4.2.2 实验试剂与仪器 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-49页 |
| 4.3.1 分子实验操作 | 第47页 |
| 4.3.2 菌株构建 | 第47页 |
| 4.3.3 实时荧光定量PCR | 第47-49页 |
| 4.3.4 HPLC法检测发酵液中的瓜氨酸 | 第49页 |
| 4.3.5 鸟氨酸产量和细胞生长测定 | 第49页 |
| 4.4 实验结果分析 | 第49-54页 |
| 4.4.1 琼脂糖凝胶电泳验证抽提RNA的质量 | 第50页 |
| 4.4.2 HPLC检测瓜氨酸 | 第50页 |
| 4.4.3 菌株构建 | 第50-51页 |
| 4.4.4 添加终止子弱化argF表达 | 第51-53页 |
| 4.4.5 优化终止子弱化argF表达 | 第53-54页 |
| 4.5 终止子推广应用于弱化argG | 第54-56页 |
| 4.5.1 添加终止子对菌株细胞生长和瓜氨酸产量的影响 | 第55页 |
| 4.5.2 相关基因转录水平分析 | 第55-56页 |
| 4.6 本章小结 | 第56-58页 |
| 第5章 总结与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录一 | 第66-67页 |
| 附录二 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
