| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 前言 | 第9-26页 |
| 1 辣椒疫霉及其引起的植物疫病 | 第9-15页 |
| 1.1 辣椒疫霉的分类地位和地理分布 | 第9-10页 |
| 1.2 辣椒疫霉的寄主范围及引起的主要病害 | 第10-11页 |
| 1.3 辣椒疫霉的生活史及侵染过程 | 第11-14页 |
| 1.4 辣椒疫霉的防治 | 第14-15页 |
| 1.4.1 农业防治 | 第14-15页 |
| 1.4.2 植物抗病性利用 | 第15页 |
| 1.4.3 化学防治 | 第15页 |
| 2 卵菌与植物的相互作用 | 第15-17页 |
| 2.1 植物免疫系统 | 第16页 |
| 2.2 卵菌AVR蛋白与植物R蛋白之间的互作 | 第16-17页 |
| 3 疫霉菌效应分子的研究进展 | 第17-26页 |
| 3.1 植物胞内效应分子(Cytoplasmic effectors) | 第17-23页 |
| 3.1.1 RXLR效应分子 | 第17-21页 |
| 3.1.2 CRN效应分子 | 第21-23页 |
| 3.2 植物质外体效应分子(Apoplastic effectors) | 第23-26页 |
| 3.2.1 Elicitin效应分子 | 第23-24页 |
| 3.2.2 PcF/SCR效应分子 | 第24-25页 |
| 3.2.3 NLP效应分子 | 第25-26页 |
| 材料与方法 | 第26-45页 |
| 1 供试菌株和植物材料 | 第26-27页 |
| 2 主要质粒载体 | 第27页 |
| 3 核酸的提取 | 第27-28页 |
| 3.1 基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 3.2 总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 3.3 质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 4 感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 4.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 4.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 5 RNA-Seq及生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 6 RT-PCR分析 | 第30-32页 |
| 6.1 cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 6.2 cDNA样品的检测及标定 | 第31页 |
| 6.3 基因转录水平分析 | 第31-32页 |
| 7 基因的克隆及载体构建 | 第32-36页 |
| 7.1 基因扩增与DNA片段回收 | 第32-33页 |
| 7.2 Over-lap PCR | 第33-34页 |
| 7.3 载体的连接构建 | 第34-36页 |
| 7.4 大肠杆菌的转化 | 第36页 |
| 7.5 菌落PCR及测序 | 第36页 |
| 8 农杆菌介导的瞬时表达分析 | 第36-38页 |
| 8.1 农杆菌的转化及阳性克隆的筛选 | 第36-37页 |
| 8.2 本氏烟注射 | 第37-38页 |
| 9 基因瞬时沉默 | 第38-41页 |
| 9.1 基因dsRNA的体外合成 | 第38-39页 |
| 9.2 dsRNA转化辣椒疫霉原生质体 | 第39-41页 |
| 9.3 转化子沉默水平分析 | 第41页 |
| 9.4 沉默转化子的致病力测定 | 第41页 |
| 10 基因稳定沉默 | 第41-44页 |
| 10.1 辣椒疫霉原生质体的稳定转化 | 第42页 |
| 10.2 沉默转化子的筛选 | 第42页 |
| 10.3 沉默转化子的致病力测定 | 第42-43页 |
| 10.4 沉默转化子的形态学性状测定 | 第43-44页 |
| 11 统计分析 | 第44-45页 |
| 结果与分析 | 第45-76页 |
| 1 辣椒疫霉与本氏烟互作体系的建立 | 第45-46页 |
| 1.1 辣椒疫霉从根部侵染本氏烟 | 第45页 |
| 1.2 辣椒疫霉休止孢在不同界面上的萌发 | 第45-46页 |
| 2 辣椒疫霉效应分子的获得 | 第46-49页 |
| 2.1 生长发育阶段高通量测序 | 第47页 |
| 2.2 效应分子的获得 | 第47-49页 |
| 3 辣椒疫霉效应分子编码基因的转录特征 | 第49-53页 |
| 3.1 不同阶段cDNA的合成及标定 | 第49-50页 |
| 3.2 效应分子编码基因的转录特征 | 第50-53页 |
| 4 辣椒疫霉效应分子激发PCD | 第53-54页 |
| 4.1 植物质外体效应分子Elicitin和NLP激发PCD | 第53-54页 |
| 4.2 植物胞内效应分子RXLR激发PCD | 第54页 |
| 5 辣椒疫霉RXLR和CRN效应分子的毒性功能 | 第54-57页 |
| 5.1 RXLR和CRN效应分子对本氏烟PCD的抑制 | 第54-56页 |
| 5.2 CRN效应分子对病菌侵染本氏烟的促进 | 第56-57页 |
| 6 辣椒疫霉转化体系的建立 | 第57页 |
| 7 三个RXLR效应分子在病菌侵染中的作用 | 第57-71页 |
| 7.1 Pc107349 | 第57-63页 |
| 7.1.1 序列多态性 | 第57-60页 |
| 7.1.2 基因沉默导致病菌致病力下降 | 第60-63页 |
| 7.2 Pc503142 | 第63-67页 |
| 7.2.1 Pc503142属于一个高度同源的蛋白家族 | 第63页 |
| 7.2.2 功能位点 | 第63-65页 |
| 7.2.3 基因稳定沉默导致病菌致病力下降 | 第65页 |
| 7.2.4 基因沉默转化子对外源活性氧的敏感性增强 | 第65-67页 |
| 7.3 Pc129113 | 第67-71页 |
| 7.3.1 序列多态性 | 第67页 |
| 7.3.2 功能位点 | 第67-70页 |
| 7.3.3 基因稳定沉默导致病菌致病力下降 | 第70-71页 |
| 8 PcF/SCR效应分子Pc96045在病菌侵染中的作用 | 第71-76页 |
| 8.1 序列多态性 | 第71-72页 |
| 8.2 基因异源表达抑制病菌侵染 | 第72-73页 |
| 8.3 病菌侵染中的致病因子 | 第73页 |
| 8.4 稳定过表达增强病菌对活性氧的耐受性 | 第73-76页 |
| 讨论 | 第76-85页 |
| 1 辣椒疫霉与本氏烟的互作体系 | 第76页 |
| 2 辣椒疫霉发育阶段转录组测序及效应分子编码基因的挖掘 | 第76-77页 |
| 3 辣椒疫霉效应分子编码基因的转录特征 | 第77-79页 |
| 4 辣椒疫霉效应分子的功能 | 第79-85页 |
| 4.1 RXLR和CRN效应分子的毒性功能 | 第79-80页 |
| 4.2 RXLR效应分子对辣椒疫霉致病性具有重要作用 | 第80-82页 |
| 4.3 质外体效应分子对辣椒疫霉致病性具有重要作用 | 第82-85页 |
| 展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-99页 |
| 附录一 本研究使用的主要仪器设备 | 第99-100页 |
| 附录二 本研究使用的菌株、培养基、引物及试剂 | 第100-109页 |
| 附录三 本研究获得的其他结果图 | 第109-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第113-114页 |
