| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-21页 |
| 2 Ezrin蛋白在骨肉瘤组织中的表达及其意义 | 第21-31页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 实验标本 | 第22页 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 HE染色 | 第22-23页 |
| 2.3.2 免疫组化染色 | 第23-24页 |
| 2.3.3 统计学分析 | 第24页 |
| 2.4 实验结果 | 第24-28页 |
| 2.4.1 骨肉瘤和骨软骨瘤组织病理学改变 | 第24页 |
| 2.4.2 Ezrin蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤组织中的表达 | 第24-27页 |
| 2.4.3 骨肉瘤组织中Ezrin蛋白表达与其临床病理特征的关系 | 第27-28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-30页 |
| 2.6 结论 | 第30-31页 |
| 3 Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞生物学行为的影响及其机制 | 第31-63页 |
| 3.1 引言 | 第31-32页 |
| 3.2 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.2.1 细胞及动物 | 第32页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-43页 |
| 3.3.1 MG-63细胞培养 | 第34页 |
| 3.3.2 Ezrin-siRNA的设计与细胞转染 | 第34-36页 |
| 3.3.3 荧光实时定量PCR | 第36-38页 |
| 3.3.4 Western blottin | 第38-41页 |
| 3.3.5 MTT法检测细胞增殖 | 第41页 |
| 3.3.6 Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力 | 第41-42页 |
| 3.3.7 Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力 | 第42页 |
| 3.3.8 细胞黏附实验 | 第42页 |
| 3.3.9 动物实验 | 第42-43页 |
| 3.3.10 统计学分析 | 第43页 |
| 3.4 实验结果 | 第43-58页 |
| 3.4.1 最佳Ezrin siRNA选择 | 第43-46页 |
| 3.4.2 Ezrin siRNA对细胞增殖活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.3 Ezrin siRNA对细胞迁移能力的影响 | 第47-49页 |
| 3.4.4 Ezrin siRNA对细胞侵袭能力的影响 | 第49-51页 |
| 3.4.5 Ezrin siRNA对细胞黏附能力的影响 | 第51页 |
| 3.4.6 Ezrin siRNA对裸鼠体重和肺表面转移结节数的影响 | 第51-53页 |
| 3.4.7 Ezrin siRNA对MMP-2、MMP-9表达的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.8 Ezrin siRNA对E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.9 Ezrin siRNA对波形蛋白表达的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.10 Ezrin siRNA对Src、p-Src表达的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.11 Ezrin siRNA对Akt、p-Akt表达的影响 | 第57-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58-62页 |
| 3.6 结论 | 第62-63页 |
| 3.6.1 运用siRNA下调Ezrin蛋白表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和转移。 | 第62页 |
| 3.6.2 Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞侵袭、转移的抑制作用是通过降低MMP-2、MMP-9、N-钙粘蛋白和波形蛋白表达、增加E-钙粘蛋白表达以及抑制Src、Akt磷酸化实现的 | 第62-63页 |
| 4 黄芩素通过抑制Ezrin表达和活性抑制MG-63细胞增殖、侵袭 | 第63-79页 |
| 4.1 引言 | 第63-64页 |
| 4.2 实验材料 | 第64-66页 |
| 4.2.1 细胞 | 第64页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第64-65页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第65-66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-70页 |
| 4.3.1 MG-63细胞培养 | 第66-67页 |
| 4.3.2 MTT法检测细胞增殖 | 第67页 |
| 4.3.3 Transwell迁移实验 | 第67-68页 |
| 4.3.4 Transwell侵袭实验 | 第68页 |
| 4.3.5 细胞黏附实验 | 第68页 |
| 4.3.6 荧光实时定量PCR | 第68-69页 |
| 4.3.7 Western blotting | 第69-70页 |
| 4.3.8 统计学分析 | 第70页 |
| 4.4 实验结果 | 第70-76页 |
| 4.4.1 黄芩素对细胞增殖的影响 | 第70-71页 |
| 4.4.2 黄芩素抑制细胞增殖的IC50 | 第71-72页 |
| 4.4.3 黄芩素对细胞迁移能力的影响 | 第72-73页 |
| 4.4.4 黄芩素对细胞侵袭能力的影响 | 第73页 |
| 4.4.5 黄芩素对细胞黏附能力的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.6 黄芩素对细胞Ezrin mRNA蛋白表达的影响 | 第74-75页 |
| 4.4.7 黄芩素对细胞Ezrin、p-Ezrin蛋白的影响 | 第75-76页 |
| 4.5 讨论 | 第76-78页 |
| 4.6 结论 | 第78-79页 |
| 4.6.1 黄芩素呈时间和剂量依赖性抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖 | 第78页 |
| 4.6.2 黄芩素可降低Ezrin mRNA、蛋白的表达及其磷酸化活化水平 | 第78-79页 |
| 5 全文结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-91页 |
| 综述 | 第91-120页 |
| 参考文献 | 第104-120页 |
| 攻读博士学位期间主要成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
