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Ezrin蛋白在骨肉瘤侵袭转移中的作用及黄芩素对其表达的影响

摘要第4-8页
ABSTRACT第8-12页
目录第13-16页
符号说明第16-18页
1 前言第18-21页
2 Ezrin蛋白在骨肉瘤组织中的表达及其意义第21-31页
    2.1 引言第21页
    2.2 实验材料第21-22页
        2.2.1 实验标本第22页
        2.2.2 主要试剂与仪器第22页
    2.3 实验方法第22-24页
        2.3.1 HE染色第22-23页
        2.3.2 免疫组化染色第23-24页
        2.3.3 统计学分析第24页
    2.4 实验结果第24-28页
        2.4.1 骨肉瘤和骨软骨瘤组织病理学改变第24页
        2.4.2 Ezrin蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤组织中的表达第24-27页
        2.4.3 骨肉瘤组织中Ezrin蛋白表达与其临床病理特征的关系第27-28页
    2.5 讨论第28-30页
    2.6 结论第30-31页
3 Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞生物学行为的影响及其机制第31-63页
    3.1 引言第31-32页
    3.2 实验材料第32-34页
        3.2.1 细胞及动物第32页
        3.2.2 主要试剂第32-33页
        3.2.3 主要仪器第33-34页
    3.3 实验方法第34-43页
        3.3.1 MG-63细胞培养第34页
        3.3.2 Ezrin-siRNA的设计与细胞转染第34-36页
        3.3.3 荧光实时定量PCR第36-38页
        3.3.4 Western blottin第38-41页
        3.3.5 MTT法检测细胞增殖第41页
        3.3.6 Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力第41-42页
        3.3.7 Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力第42页
        3.3.8 细胞黏附实验第42页
        3.3.9 动物实验第42-43页
        3.3.10 统计学分析第43页
    3.4 实验结果第43-58页
        3.4.1 最佳Ezrin siRNA选择第43-46页
        3.4.2 Ezrin siRNA对细胞增殖活性的影响第46-47页
        3.4.3 Ezrin siRNA对细胞迁移能力的影响第47-49页
        3.4.4 Ezrin siRNA对细胞侵袭能力的影响第49-51页
        3.4.5 Ezrin siRNA对细胞黏附能力的影响第51页
        3.4.6 Ezrin siRNA对裸鼠体重和肺表面转移结节数的影响第51-53页
        3.4.7 Ezrin siRNA对MMP-2、MMP-9表达的影响第53-54页
        3.4.8 Ezrin siRNA对E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白表达的影响第54-55页
        3.4.9 Ezrin siRNA对波形蛋白表达的影响第55-56页
        3.4.10 Ezrin siRNA对Src、p-Src表达的影响第56-57页
        3.4.11 Ezrin siRNA对Akt、p-Akt表达的影响第57-58页
    3.5 讨论第58-62页
    3.6 结论第62-63页
        3.6.1 运用siRNA下调Ezrin蛋白表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和转移。第62页
        3.6.2 Ezrin siRNA对骨肉瘤细胞侵袭、转移的抑制作用是通过降低MMP-2、MMP-9、N-钙粘蛋白和波形蛋白表达、增加E-钙粘蛋白表达以及抑制Src、Akt磷酸化实现的第62-63页
4 黄芩素通过抑制Ezrin表达和活性抑制MG-63细胞增殖、侵袭第63-79页
    4.1 引言第63-64页
    4.2 实验材料第64-66页
        4.2.1 细胞第64页
        4.2.2 主要试剂第64-65页
        4.2.3 主要仪器第65-66页
    4.3 实验方法第66-70页
        4.3.1 MG-63细胞培养第66-67页
        4.3.2 MTT法检测细胞增殖第67页
        4.3.3 Transwell迁移实验第67-68页
        4.3.4 Transwell侵袭实验第68页
        4.3.5 细胞黏附实验第68页
        4.3.6 荧光实时定量PCR第68-69页
        4.3.7 Western blotting第69-70页
        4.3.8 统计学分析第70页
    4.4 实验结果第70-76页
        4.4.1 黄芩素对细胞增殖的影响第70-71页
        4.4.2 黄芩素抑制细胞增殖的IC50第71-72页
        4.4.3 黄芩素对细胞迁移能力的影响第72-73页
        4.4.4 黄芩素对细胞侵袭能力的影响第73页
        4.4.5 黄芩素对细胞黏附能力的影响第73-74页
        4.4.6 黄芩素对细胞Ezrin mRNA蛋白表达的影响第74-75页
        4.4.7 黄芩素对细胞Ezrin、p-Ezrin蛋白的影响第75-76页
    4.5 讨论第76-78页
    4.6 结论第78-79页
        4.6.1 黄芩素呈时间和剂量依赖性抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖第78页
        4.6.2 黄芩素可降低Ezrin mRNA、蛋白的表达及其磷酸化活化水平第78-79页
5 全文结论第79-80页
参考文献第80-91页
综述第91-120页
    参考文献第104-120页
攻读博士学位期间主要成果第120-121页
致谢第121页

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