| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-25页 |
| ·膜联蛋白A2 | 第13-21页 |
| ·膜联蛋白(Annexins)家族简介 | 第13页 |
| ·膜联蛋白A2(ANXA2)基因、蛋白结构特点及主要存在形式 | 第13-14页 |
| ·ANXA2与肿瘤相关性研究进展 | 第14-21页 |
| ·质粒载体介导的RNA干扰技术 | 第21-23页 |
| ·RNA干扰机制 | 第21-22页 |
| ·质粒载体表达siRNA及在肿瘤研究中的应用 | 第22-23页 |
| ·细胞转染 | 第23-25页 |
| ·瞬时转染和稳定转染 | 第23页 |
| ·磷酸钙介导的细胞转染 | 第23-25页 |
| 第2章 本课题主要内容、技术路线、研究意义及创新之处 | 第25-27页 |
| 第3章 磷酸钙法转染肝癌细胞效率优化 | 第27-39页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·质粒及细胞株 | 第27页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第27-28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-30页 |
| ·方法 | 第30-33页 |
| ·siRNA设计合成及重组质粒构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒小量制备(参照omega无内毒素小量制备试剂盒说明) | 第31页 |
| ·细胞培养 | 第31-32页 |
| ·细胞转染、条件优化及效率评估 | 第32-33页 |
| ·统计学分析 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·siRNA序列 | 第33页 |
| ·重组质粒电泳检测 | 第33-34页 |
| ·转染前细胞汇合率的影响 | 第34-35页 |
| ·质粒剂量的优化 | 第35页 |
| ·质粒复合物形成时间的影响 | 第35-36页 |
| ·孵育时间优化 | 第36页 |
| ·抗生素及细胞传代次数 | 第36-37页 |
| ·血清对转染效率的影响 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第4章 RNAi沉默ANXA2表达对SMMC-7721细胞生物学行为的影响 | 第39-61页 |
| ·材料 | 第39-42页 |
| ·质粒及细胞株 | 第39页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第39-40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40-42页 |
| ·方法 | 第42-49页 |
| ·细胞培养及质粒制备:(同上第三章) | 第42页 |
| ·实验分组及转染 | 第42页 |
| ·半定量RT-PCR检测ANXA2 mRNA表达 | 第42-45页 |
| ·Western Blot检测ANXA2蛋白表达 | 第45-47页 |
| ·免疫细胞化学检测ANXA2蛋白表达定位 | 第47页 |
| ·体外损伤修复试验 | 第47-48页 |
| ·细胞生长能力分析(MTT法) | 第48页 |
| ·细胞凋亡(Hoechast33258染色) | 第48页 |
| ·统计学处理 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-58页 |
| ·肝癌SMMC-7721细胞总RNA表达鉴定 | 第49页 |
| ·半定量RT-PCR检测ANXA2 mRNA水平 | 第49-52页 |
| ·Western blotting检测ANXA2蛋白水平 | 第52-54页 |
| ·免疫细胞化学检测ANXA2蛋白表达定位 | 第54-55页 |
| ·细胞运动能力变化 | 第55-56页 |
| ·细胞生长能力分析 | 第56-58页 |
| ·细胞凋亡形态学改变 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 总结 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第75-76页 |
