| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1. 线粒体功能失调研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1 线粒体功能失调的发生 | 第12页 |
| 1.2 线粒体功能失调与活性氧紊乱 | 第12-14页 |
| 2. 活性氧类物质的研究进展 | 第14-16页 |
| 2.1 活性氧类物质 | 第14页 |
| 2.2 活性氧类物质的产生 | 第14-16页 |
| 2.2.1 总活性氧类物质的产生 | 第14-15页 |
| 2.2.2 线粒体呼吸链与活性氧类物质的产生 | 第15-16页 |
| 3. 采用RNAi技术建立秀丽隐杆线虫线粒体功能失调模型 | 第16-19页 |
| 3.1 线粒体功能失调模型的研究进展 | 第16页 |
| 3.2 秀丽隐杆线虫线粒体功能失调模型的优势 | 第16-19页 |
| 3.2.1 秀丽隐杆线虫RNAi的方法 | 第17-18页 |
| 3.2.2 用RNAi的方法建立秀丽隐杆线虫线粒体功能失调模型的优势 | 第18-19页 |
| 3.3.2.1 mev-1基因与线粒体功能失调的关系 | 第19页 |
| 3.3.2.2 isp-1基因与线粒体功能失调的关系 | 第19页 |
| 4. 课题提出 | 第19-21页 |
| 第二章 线粒体呼吸链mev-1和isp-1基因RNAi克隆菌的构建 | 第21-36页 |
| 1. 前言 | 第21页 |
| 2. 材料和试剂 | 第21-23页 |
| 2.1 生物材料 | 第21页 |
| 2.2 试剂与培养基 | 第21-23页 |
| 2.2.1 相关试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.2 试剂盒 | 第22页 |
| 2.2.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.3 主要仪器 | 第23页 |
| 3. 实验方法 | 第23-28页 |
| 3.1 引物设计 | 第24页 |
| 3.2 秀丽隐杆线虫基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 3.3 目的片段的扩增 | 第24-25页 |
| 3.4 目的片段的双酶切 | 第25页 |
| 3.5 质粒L4440的制备 | 第25-26页 |
| 3.6 目的片段和质粒的连接 | 第26-27页 |
| 3.7 E.coli HT115 (DE3)感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 3.8 连接产物转化E.coli HT115 (DE3)、筛选阳性克隆及其鉴定 | 第27-28页 |
| 3.8.1 连接产物转化E.coli HT115(DE3) | 第27页 |
| 3.8.2 菌液PCR鉴定阳性克隆 | 第27页 |
| 3.8.3 阳性克隆的质粒双酶切验证 | 第27-28页 |
| 4. 结果分析 | 第28-34页 |
| 4.1 基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 4.2 质粒及目的片段双酶切定量结果 | 第29-30页 |
| 4.2.1 质粒及mev-1片段双酶切定量结果 | 第29页 |
| 4.2.2 质粒及isp-1片段双酶切定量结果 | 第29-30页 |
| 4.3 菌液PCR鉴定结果 | 第30-31页 |
| 4.3.1 mev-1菌液PCR结果 | 第30-31页 |
| 4.3.2 isp-1菌液PCR结果 | 第31页 |
| 4.4 双酶切鉴定结果 | 第31-33页 |
| 4.4.1 mev-1干扰质粒载体双酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| 4.4.2 isp-1干扰质粒载体双酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| 4.5 基因序列鉴定 | 第33-34页 |
| 4.5.1 mev-1测序结果 | 第33页 |
| 4.5.2 isp-1测序结果 | 第33-34页 |
| 5. 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 秀丽隐杆线虫线粒体功能失调模型的建立 | 第36-47页 |
| 1. 前言 | 第36页 |
| 2. 材料和试剂 | 第36-37页 |
| 2.1 生物材料 | 第36页 |
| 2.2 试剂与培养基 | 第36-37页 |
| 2.2.1 相关试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.2 试剂盒 | 第37页 |
| 2.2.3 培养基 | 第37页 |
| 2.3 主要仪器 | 第37页 |
| 3. 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.1 秀丽隐杆线虫mev-1、isp-1基因RNAi效率检测 | 第37-40页 |
| 3.1.1 线虫的RNAi处理 | 第38页 |
| 3.1.2 线虫总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.1.3 cDNA的合成 | 第38页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第38页 |
| 3.1.5 引物的特异性评估 | 第38-39页 |
| 3.1.6 荧光实时定量PCR检测对应基因的表达量 | 第39-40页 |
| 3.2 秀丽隐杆线虫mev-1、isp-1基因RNAi后总活性氧含量的测定 | 第40页 |
| 3.2.1 线虫的RNAi处理 | 第40页 |
| 3.2.2 线虫总活性氧含量的检测 | 第40页 |
| 3.3 秀丽隐杆线虫mev-1、isp-1基因RNAi后单位蛋白耗氧量的检测 | 第40-42页 |
| 3.3.1 线虫的RNAi处理 | 第40页 |
| 3.3.2 线虫耗氧量的检测 | 第40-41页 |
| 3.3.3 线虫总蛋白的检测 | 第41-42页 |
| 4. 结果分析 | 第42-45页 |
| 4.1 秀丽隐杆线虫mev-1、isp-1基因RNAi效率检测 | 第42-44页 |
| 4.1.1 总RNA提取结果 | 第42-43页 |
| 4.1.2 引物特异性评估结果 | 第43页 |
| 4.1.3 实时荧光定量PCR的标准曲线和溶解曲线 | 第43页 |
| 4.1.4 RNAi后基因mRNA表达量的变化 | 第43-44页 |
| 4.2 秀丽隐杆线虫mev-1、isp-1基因RNAi后总活性氧含量的变化 | 第44-45页 |
| 4.3 秀丽隐杆线虫mev-1、isp-1基因RNAi后单位蛋白的耗氧量的变化 | 第45页 |
| 5. 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 秀丽隐杆线虫线粒体功能失调模型的验证 | 第47-57页 |
| 1. 前言 | 第47页 |
| 2. 材料与试剂 | 第47-49页 |
| 2.1 生物材料 | 第47页 |
| 2.2 试剂与培养基 | 第47-49页 |
| 2.2.1 相关试剂 | 第47-48页 |
| 2.2.2 培养基 | 第48-49页 |
| 2.3 主要仪器 | 第49页 |
| 3. 方法 | 第49-50页 |
| 3.1 生物材料的准备 | 第49页 |
| 3.1.1 秀丽隐杆线虫的同步化 | 第49页 |
| 3.1.2 E.coli OP50的培养 | 第49页 |
| 3.1.3 RNAi菌液的培养 | 第49页 |
| 3.1.4 线虫的RNAi处理 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 3.2.1 PQ及NAC对RNAi后秀丽隐杆线虫寿命的影响 | 第49页 |
| 3.2.2 PQ及NAC对RNAi后秀丽隐杆线虫运动能力的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.3 PQ及NAC对RNAi后秀丽隐杆线虫抗热胁迫能力的影响 | 第50页 |
| 4. 结果与分析 | 第50-55页 |
| 4.1 PQ及NAC对mev-1和isp-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫寿命的影响 | 第50-53页 |
| 4.1.1 PQ及NAC对mev-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫寿命的影响 | 第50-51页 |
| 4.1.2 PQ及NAC对isp-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫寿命的影响 | 第51-53页 |
| 4.2 PQ及NAC对mev-1和isp-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫运动能力的影响 | 第53-54页 |
| 4.2.1 PQ及NAC对mev-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫运动能力的影响 | 第53页 |
| 4.2.2 PQ及NAC对isp-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫运动能力的影响 | 第53-54页 |
| 4.3 PQ及NAC对mev-1和isp-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫抗热胁迫能力的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.1 PQ及NAC对mev-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫抗热胁迫能力的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.2 PQ及NAC对isp-1基因RNAi后秀丽隐杆线虫抗热胁迫能力的影响 | 第55页 |
| 5. 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 在校期间的研究成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
