| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-29页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第16-18页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.2 主要工作液的配置 | 第18-19页 |
| 2.3 HUVEC的培养及药物干预方法 | 第19页 |
| 2.3.1 细胞培养与传代 | 第19页 |
| 2.3.2 细胞冻存 | 第19页 |
| 2.3.3 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.3.4 药物干预方法 | 第19页 |
| 2.4 MTT法确定各干预药物的最佳浓度 | 第19-20页 |
| 2.4.1 细胞种板 | 第19页 |
| 2.4.2 药物干预 | 第19页 |
| 2.4.3 加入MTT工作液 | 第19-20页 |
| 2.4.4 DMSO溶解结晶 | 第20页 |
| 2.4.5 分光光度仪上测定各孔吸光度 | 第20页 |
| 2.4.6 结果分析 | 第20页 |
| 2.5 实验设计 | 第20-21页 |
| 2.5.1 HNP-1对HUVEC内皮细胞IL-8mRNA表达的影响 | 第20页 |
| 2.5.2 HNP-1诱导HUVEC内皮细胞表达IL-8的信号通路研究 | 第20-21页 |
| 2.6 技术路线 | 第21-22页 |
| 2.7 RT-PCR法测定mRNA的相对表达量 | 第22-25页 |
| 2.7.1 提取总RNA | 第22-23页 |
| 2.7.2 总RNA的浓度及纯度测定 | 第23页 |
| 2.7.3 总RNA逆转录为cDNA | 第23页 |
| 2.7.4 引物设计及合成 | 第23-24页 |
| 2.7.5 PCR操作步骤 | 第24-25页 |
| 2.7.6 琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物 | 第25页 |
| 2.7.7 凝胶成像系统下拍照、结果分析 | 第25页 |
| 2.8 Western blot法测定蛋白的相对表达量 | 第25-28页 |
| 2.8.1 总蛋白的提取 | 第25-26页 |
| 2.8.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第26页 |
| 2.8.3 SDS-PAGE凝胶的制备 | 第26-27页 |
| 2.8.4 蛋白变性与上样 | 第27页 |
| 2.8.5 电泳 | 第27页 |
| 2.8.6 转膜 | 第27页 |
| 2.8.7 封闭 | 第27页 |
| 2.8.8 孵育一抗 | 第27页 |
| 2.8.9 洗脱 | 第27页 |
| 2.8.10 孵育二抗 | 第27页 |
| 2.8.11 洗脱 | 第27-28页 |
| 2.8.12 显影 | 第28页 |
| 2.8.13 结果分析 | 第28页 |
| 2.9 统计分析 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-43页 |
| 3.1 倒置显微镜下观察细胞形态 | 第29页 |
| 3.2 MTT法检测药物的细胞毒性,确定药物最佳干预浓度 | 第29-32页 |
| 3.2.1 HNP-1的细胞毒性检测 | 第29-30页 |
| 3.2.2 P2Y_6受体拮抗剂MRS2578的细胞毒性检测 | 第30页 |
| 3.2.3 PI3K抑制剂LY294002的细胞毒性检测 | 第30-31页 |
| 3.2.4 MEK抑制剂PD98059的细胞毒性检测 | 第31-32页 |
| 3.3 HNP-1干预HUVEC后IL-8mRNA的表达 | 第32-34页 |
| 3.4 HNP-1干预HUVEC后P2Y6mRNA的表达 | 第34-35页 |
| 3.5 P2Y6受体介导HNP-1诱导HUVEC IL-8的表达 | 第35-37页 |
| 3.6 MAPK/ERK通路及PI3K/AKT通路在HNP-1诱导HUVEC表达IL-8中的作用 | 第37-40页 |
| 3.6.1 RT-PCR法检测特异性MEK抑制剂、PI3K抑制剂干预HUVEC前后HNP-1诱导IL-8 mRNA的相对表达量 | 第37-39页 |
| 3.6.2 western blot法检测HNP-1干预HUVEC后ERK1/2、AKT的磷酸化水平 | 第39-40页 |
| 3.7 P2Y6受体介导HNP-1诱导的ERK1/2的磷酸化 | 第40-41页 |
| 3.8 ERK1/2与PI3K在HNP-1诱导HUVEC表达IL-8的信号通路中的的关系 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 综述 | 第52-62页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 攻读学位期间主要研究成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
