| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 代谢木糖产乙醇的发展现状 | 第12-13页 |
| 1.3 木糖代谢途径 | 第13-16页 |
| 1.4 木糖醇脱氢酶的来源菌及性质研究 | 第16-18页 |
| 1.4.1 发酵木糖的丝状真菌 | 第16页 |
| 1.4.2 发酵木糖的酵母菌 | 第16-17页 |
| 1.4.3 不同菌株中的木糖醇脱氢酶性质 | 第17-18页 |
| 1.5 酿酒酵母工程菌中的木糖醇脱氢酶 | 第18-20页 |
| 1.6 本实验的研究内容和意义 | 第20-22页 |
| 1.7 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 木糖醇脱氢酶基因的克隆 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 常用生化试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 常用分子生物学试剂、酶及试剂盒 | 第24页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 2.1.5 培养基及配方 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 五种不同酵母中XYL2基因的基因组DNA扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.2 酿酒酵母木糖醇脱氢酶基因表达载体构建 | 第26-28页 |
| 2.2.3 木糖醇脱氢酶基因重组质粒的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.4 将构建好的表达载体转入酿酒酵母菌株 INVsc1 | 第31-32页 |
| 2.2.5 酿酒酵母木糖醇脱氢酶基因测序分析 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.3.1 目的片段的获得 | 第32-33页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 酿酒酵母重组菌株的构建 | 第34页 |
| 2.3.4 重组质粒的测序分析 | 第34-38页 |
| 2.4 讨论分析 | 第38-39页 |
| 第三章 木糖脱氢酶的鉴定和定位研究 | 第39-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第39页 |
| 3.1.2 常用生化试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 常用分子生物学试剂、酶及试剂盒 | 第39-40页 |
| 3.1.4 主要仪器与设备 | 第40页 |
| 3.1.5 培养基及配方 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 目的基因片段的获得 | 第40-41页 |
| 3.2.2 酿酒酵母木糖醇脱氢酶基因绿色荧光蛋白定位 | 第41-42页 |
| 3.2.3 转入重组质粒的酵母诱导表达 | 第42页 |
| 3.2.4 XYL2编码的木糖醇脱氢酶提取、纯化及检测 | 第42-43页 |
| 3.2.5 蛋白含量测定 | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-46页 |
| 3.3.1 木糖醇脱氢酶绿色荧光蛋白定位 | 第44-46页 |
| 3.3.2 木糖醇脱氢酶基因编码蛋白的表达分析 | 第46页 |
| 3.4 讨论分析 | 第46-48页 |
| 第四章 木糖醇脱氢酶的蛋白性质差异测定 | 第48-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 常用生化试剂 | 第48页 |
| 4.1.2 常用分子生物学试剂、酶及试剂盒 | 第48页 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 | 第48页 |
| 4.1.5 培养基及配方 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 木糖醇脱氢酶的提取纯化 | 第48-49页 |
| 4.2.2 木糖醇脱氢酶的活性检测 | 第49-50页 |
| 4.2.3 金属离子、盐离子和其他添加物对木糖醇脱氢酶的影响 | 第50页 |
| 4.2.4 木糖醇脱氢酶的稳定性研究 | 第50-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-62页 |
| 4.3.1 五种不同的木糖醇脱氢酶对NAD~+的还原活力分析 | 第51页 |
| 4.3.2 木糖醇脱氢酶的动力学参数 | 第51-53页 |
| 4.3.3 pH值和温度对木糖醇脱氢酶活性的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.4 金属离子对木糖醇脱氢酶活性的影响 | 第54-56页 |
| 4.3.5 盐离子对木糖醇脱氢酶活性的影响 | 第56-57页 |
| 4.3.6 其他添加物对木糖醇脱氢酶活性的影响 | 第57-60页 |
| 4.3.7 木糖醇脱氢酶对温度和pH的耐受性 | 第60-62页 |
| 4.4 讨论分析 | 第62-65页 |
| 第五章 论文主要创新点与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 论文主要创新点 | 第65页 |
| 5.2 研究展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 基金项目 | 第76页 |
| 研究生期间主要成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
