| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 副溶血性弧菌简介 | 第10页 |
| 1.2 副溶血性弧菌检测方法 | 第10-18页 |
| 1.2.1 培养法 | 第11-12页 |
| 1.2.1.1 传统培养法 | 第11-12页 |
| 1.2.1.2 显色培养基法 | 第12页 |
| 1.2.2 免疫学法 | 第12页 |
| 1.2.3 核酸杂交法 | 第12-13页 |
| 1.2.4 聚合酶链式反应 | 第13-14页 |
| 1.2.5 等温核酸扩增反应 | 第14-18页 |
| 1.2.5.1 环介导等温扩增反应 | 第14-15页 |
| 1.2.5.2 依赖于解旋酶的等温扩增反应 | 第15-16页 |
| 1.2.5.3 基于变性泡介导的链交换扩增反应 | 第16-17页 |
| 1.2.5.4 基于内切酶和聚合酶联用的链交换扩增反应 | 第17-18页 |
| 1.3 核酸扩增反应污染防治简介 | 第18-20页 |
| 1.3.1 闭管检测技术 | 第18-19页 |
| 1.3.1.1 焦磷酸镁沉淀闭管检测技术 | 第19页 |
| 1.3.1.2 金属离子指示剂闭管检测技术 | 第19页 |
| 1.3.1.3 SYBRGreenI蜡封闭管检测技术 | 第19页 |
| 1.3.2 化学修饰法 | 第19-20页 |
| 1.3.2.1 异补骨脂素法 | 第19-20页 |
| 1.3.2.2 羟胺法 | 第20页 |
| 1.3.3 酶消化法 | 第20页 |
| 1.3.3.1 脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)法 | 第20页 |
| 1.3.3.2 尿嘧啶糖基化酶(UDG)法 | 第20页 |
| 1.4 本论文的研究意义与主要内容 | 第20-22页 |
| 第二章 LAMP法对副溶血性弧菌核酸检测的研究 | 第22-37页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验部分 | 第22-26页 |
| 2.2.1 仪器与试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 副溶血性弧菌培养基的配制及增菌培养 | 第23-25页 |
| 2.2.3 副溶血性弧菌实际样品污染 | 第25页 |
| 2.2.4 副溶血性弧菌基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
| 2.2.5.1 琼脂糖凝胶电泳的原理 | 第25页 |
| 2.2.5.2 琼脂糖凝胶电泳的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.6 实时荧光检测体系 | 第26页 |
| 2.2.6.1 环介导等温扩增反应体系 | 第26页 |
| 2.2.6.2 PCR扩增反应体系 | 第26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-36页 |
| 2.3.1 副溶血性弧菌基因组DNA电泳结果 | 第26-27页 |
| 2.3.2 LAMP反应对副溶血性弧菌检测的研究 | 第27-36页 |
| 2.3.2.1 LAMP反应原理 | 第27-28页 |
| 2.3.2.2 LAMP反应温度优化 | 第28-29页 |
| 2.3.2.3 LAMP反应检测副溶血性弧菌基因组DNA结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2.4 LAMP反应直接检测能力验证 | 第30-31页 |
| 2.3.2.5 LAMP反应特异性及抗干扰能力验证 | 第31-33页 |
| 2.3.2.6 LAMP反应实际样品模拟污染检测 | 第33-35页 |
| 2.3.2.7 LAMP反应比色检测 | 第35-36页 |
| 2.4 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 LAMP反应防污染的研究 | 第37-56页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验部分 | 第37-40页 |
| 3.2.1 仪器与试剂 | 第37-39页 |
| 3.2.2 实时荧光检测体系 | 第39-40页 |
| 3.2.2.1 环介导等温扩增反应体系 | 第39-40页 |
| 3.2.2.2 环介导等温扩增防污染反应体系 | 第40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-55页 |
| 3.3.1 LAMP反应污染 | 第40-41页 |
| 3.3.2 引物酶法LAMP反应防污染原理 | 第41-43页 |
| 3.3.3 LAMP反应防污染引物优化 | 第43-44页 |
| 3.3.4 LAMP反应防污染Buffer优化 | 第44页 |
| 3.3.5 LAMP反应防污染可行性验证 | 第44-45页 |
| 3.3.6 LAMP反应防污染预处理阶段温度优化 | 第45-46页 |
| 3.3.7 LAMP反应防污染预处理阶段时间优化 | 第46-48页 |
| 3.3.8 引物酶法防污染对LAMP反应的影响及优化 | 第48-51页 |
| 3.3.9 LAMP反应模拟污染物的检测限 | 第51-52页 |
| 3.3.10 引物酶法防污染的效率 | 第52-55页 |
| 3.4 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 引物酶法在其他核酸扩增方法中的应用 | 第56-70页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验部分 | 第56-60页 |
| 4.2.1 仪器与试剂 | 第56-58页 |
| 4.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第58页 |
| 4.2.2.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理 | 第58页 |
| 4.2.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳的制备 | 第58页 |
| 4.2.3 实时荧光检测体系 | 第58-60页 |
| 4.2.3.1 变性泡介导的链交换扩增反应体系 | 第58-59页 |
| 4.2.3.2 变性泡介导的链交换防污染扩增反应体系 | 第59页 |
| 4.2.3.3 PCR扩增反应体系 | 第59页 |
| 4.2.3.4 PCR引物酶法防污染扩增反应体系 | 第59-60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-70页 |
| 4.3.1 SEA引物酶法防污染引物设计 | 第60页 |
| 4.3.2 SEA引物酶法防污染Buffer优化 | 第60-61页 |
| 4.3.3 SEA引物酶法防污染反应初步验证 | 第61-62页 |
| 4.3.4 SEA引物酶法防污染处理效果 | 第62页 |
| 4.3.5 SEA引物酶法防污染实际污染处理效果 | 第62-63页 |
| 4.3.6 SEA引物酶法防污染小结 | 第63页 |
| 4.3.7 PCR引物酶法防污染引物设计 | 第63-64页 |
| 4.3.8 PCR反应Buffer优化 | 第64-65页 |
| 4.3.9 PCR引物酶法防污染反应初步验证 | 第65-66页 |
| 4.3.10 PCR模拟污染物检测限 | 第66-67页 |
| 4.3.11 PCR引物酶法防污染处理效果 | 第67-68页 |
| 4.3.12 PCR引物酶法防污染引物再设计 | 第68页 |
| 4.3.13 PCR引物酶法防污染新引物处理效果 | 第68-69页 |
| 4.3.14 PCR引物酶法防污染小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录：论文中使用的缩略词 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第80-81页 |
