| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型及细胞跨膜糖蛋白NMB前体研究进展 | 第13-24页 |
| 1.1 猪圆环病毒2型研究进展 | 第13-20页 |
| 1.1.1 病毒的发现和基本生物学特性 | 第13-15页 |
| 1.1.2 细胞周期调控与PCV2复制 | 第15-17页 |
| 1.1.3 PCV2感染的主要临床表现及病理变化 | 第17-18页 |
| 1.1.4 PCV2致病机理 | 第18-19页 |
| 1.1.5 诊断及防控 | 第19-20页 |
| 1.2 跨膜糖蛋白NMB前体(GPNMB)研究进展 | 第20-23页 |
| 1.2.1 GPNMB概述 | 第20-21页 |
| 1.2.2 GPNMB在组织中的表达 | 第21-22页 |
| 1.2.3 GPNMB与癌症 | 第22-23页 |
| 1.2.4 GPNMB与PCV2感染 | 第23页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 试验研究 | 第24-67页 |
| 第二章 猪肺泡巨噬细胞中猪圆环病毒2型ORF5蛋白互作蛋白的筛选 | 第24-40页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 细胞、病毒与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 重组质粒pEGFP-ORF5转染猪肺泡巨噬细胞 | 第25页 |
| 2.2.2 PCV2感染猪肺泡巨噬细胞 | 第25-26页 |
| 2.2.3 高通量测序及结果分析 | 第26-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-37页 |
| 2.3.1 样品测评及测序数据统计 | 第28页 |
| 2.3.2 差异基因的功能注释分类和通路富集分析 | 第28-34页 |
| 2.3.3 PCV2和ORF5对GPNMB表达的影响 | 第34-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 PCV2ORF5蛋白与GPNMB蛋白的相互作用研究 | 第40-54页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 细胞、病毒、菌株与质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-47页 |
| 3.2.1 载体的构建与鉴定 | 第41-45页 |
| 3.2.2 重组质粒的表达鉴定 | 第45页 |
| 3.2.3 PCV2ORF5与GPNMB的亚细胞定位 | 第45-46页 |
| 3.2.4 ORF5与GPNMB相互作用的免疫共沉淀(Co-IP)试验 | 第46-47页 |
| 3.3 结果 | 第47-52页 |
| 3.3.1 载体的构建及酶切鉴定结果 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组质粒的表达鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 ORF5与GPNMB的亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 3.3.4 ORF5与GPNMB相互作用的Co-IP试验 | 第50-51页 |
| 3.3.5 ORF5与GPNMB相互作用的GST-pulldown试验 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 宿主细胞GPNMB对PCV2复制的影响 | 第54-67页 |
| 4.1 材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 细胞、菌株与质粒 | 第54页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第54-55页 |
| 4.2 方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 GPNMB基因过表达与shRNA干扰慢病毒载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.2.2 GPNMB过表达及干扰慢病毒的包装 | 第56页 |
| 4.2.3 GPNMB表达及干扰细胞系的建立 | 第56页 |
| 4.2.4 GPNMB对PCV2复制的影响 | 第56页 |
| 4.2.5 GPNMB蛋白对细胞周期的影响 | 第56-57页 |
| 4.3 结果 | 第57-64页 |
| 4.3.1 重组慢病毒载体的构建 | 第57-59页 |
| 4.3.2 过表达及干扰GPNMB细胞系的建立及鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.3 GPNMB对PCV2复制的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.4 GPNMB对细胞周期的影响 | 第61-64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-80页 |
| 缩略词 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 作者简介 | 第84页 |
