| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 植物盐害及耐盐机理 | 第10-14页 |
| 1.1.1 土壤盐渍化对植物的影响 | 第10-11页 |
| 1.1.2 盐胁迫对植物的影响及响应机理 | 第11-13页 |
| 1.1.3 胡杨的耐盐胁迫机理 | 第13-14页 |
| 1.2 植物Na~+/H~+反向转运体的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 质膜Na~+/H~+反向转运体 | 第15-16页 |
| 1.2.2 液胞膜Na~+/H~+反向转运体 | 第16-17页 |
| 1.2.3 内膜体Na~+/H~+反向转运体 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.2 载体与菌株 | 第18页 |
| 2.3 试剂 | 第18页 |
| 2.4 仪器与设备 | 第18-19页 |
| 2.5 引物 | 第19页 |
| 2.6 胡杨愈伤组织的接种与培养 | 第19-20页 |
| 2.7 胡杨愈伤组织总RNA提取及鉴定 | 第20-21页 |
| 2.7.1 胡杨愈伤组织总RNA提取 | 第20页 |
| 2.7.2 胡杨总RNA质量检测 | 第20-21页 |
| 2.8 反转录合成胡杨cDNA | 第21页 |
| 2.9 胡杨PeNHX3基因CDS序列的扩增 | 第21-26页 |
| 2.9.1 PeNHX3基因的克隆 | 第21-22页 |
| 2.9.2 PeNHX3扩增产物回收 | 第22-23页 |
| 2.9.3 PeNHX3回收产物及载体酶切 | 第23页 |
| 2.9.4 酶切产物纯化 | 第23页 |
| 2.9.5 载体与目的基因连接 | 第23-24页 |
| 2.9.6 大肠杆菌感受态转化 | 第24页 |
| 2.9.7 阳性克隆的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.9.8 质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.9.9 单、双酶切验证 | 第26页 |
| 2.9.10 测序分析 | 第26页 |
| 2.10 胡杨Na~+/H~+反向转运体家族的系统进化分析 | 第26-27页 |
| 2.11酵母异源表达探究PeNHX3耐盐性 | 第27-31页 |
| 2.11.1 酵母表达载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.11.2 胡杨PeNHX3酵母生长实验 | 第29-31页 |
| 2.12 构建入门载体pDONR-PeNIHX3 | 第31页 |
| 2.13 PeNHX3在烟草中亚细胞定位 | 第31-34页 |
| 2.13.1 植物表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.13.2 农杆菌感受态的制备及农杆菌转化 | 第32-33页 |
| 2.13.3 Protocol烟草瞬时表达体系的建立 | 第33页 |
| 2.13.4 烟草GFP荧光观察 | 第33-34页 |
| 2.14 PeNHX3转基因植株的制备 | 第34-36页 |
| 2.14.1 农杆菌侵染得到T1代植株 | 第34-35页 |
| 2.14.2 转基因植株T2代筛选 | 第35页 |
| 2.14.3 植物DNA提取及鉴定 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果 | 第36-45页 |
| 3.1 胡杨Na~+/H~+反向转运体基因家族的系统进化分析 | 第36页 |
| 3.2 胡杨PeNHX3基因的克隆 | 第36-38页 |
| 3.2.1 胡杨愈伤组织总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.2.2 胡杨PeNHX3 CDS序列的扩增 | 第37-38页 |
| 3.3 胡杨PeNHX3的亚细胞定位分析 | 第38-40页 |
| 3.3.1 Gateway构建PeNHX3入门载体 | 第38-39页 |
| 3.3.2 植物表达载体构建 | 第39-40页 |
| 3.3.3 PeNHX3在烟草中的定位 | 第40页 |
| 3.4 酵母生长实验分析PeNHX3离子转运特性 | 第40-42页 |
| 3.4.1 pDR196-PeNHX3转化酵母AXT3 | 第40-41页 |
| 3.4.2 PeNHX3在酵母中的耐盐性分析 | 第41-42页 |
| 3.5 转基因拟南芥植株制备及表型观察 | 第42-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 胡杨PeNHX3可能在植物耐盐性和调节Na~+、K~+动态平衡等方面起重要作用 | 第45页 |
| 4.2 酵母生长实验证明胡杨PeNHX3具有Na~+/H~+转运活性 | 第45页 |
| 4.3 胡杨PeNHX3耐盐性研究展望 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
