| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1. 褐藻生物学特征 | 第16-20页 |
| 1.1 海藻简介 | 第16-17页 |
| 1.2 海带简介 | 第17页 |
| 1.2.1 海带的分类地位、分布以及基本生物学特征 | 第17-18页 |
| 1.2.2 海带属生活史简介 | 第18-19页 |
| 1.2.3 海带的应用价值 | 第19-20页 |
| 2. 褐藻胶概况 | 第20-23页 |
| 2.1 褐藻胶的结构以及来源 | 第20-21页 |
| 2.2 褐藻胶生物活性以及应用研究概述 | 第21-23页 |
| 2.2.1 褐藻胶多糖的生物活性 | 第21-22页 |
| 2.2.2 褐藻胶低聚糖的生物活性 | 第22-23页 |
| 3. 褐藻胶的生物合成研究概述 | 第23-33页 |
| 3.1 褐藻胶的生物合成研究进展 | 第23-25页 |
| 3.2 藻类中褐藻胶生物合成通路研究进展 | 第25-26页 |
| 3.3 褐藻胶合成通路关键基因研究概况 | 第26-33页 |
| 3.3.1 磷酸甘露糖异构酶（PMI）研究概况 | 第26-28页 |
| 3.3.2 磷酸甘露糖变位酶（PMM）研究概况 | 第28-29页 |
| 3.3.3 GDP-甘露糖焦磷酸化酶（MPG）研究概况 | 第29-30页 |
| 3.3.4 GDP-甘露糖脱氢酶（GMD）研究概况 | 第30-31页 |
| 3.3.5 甘露糖醛酸 C5 差向异构酶基因（AlgG）研究概况 | 第31-33页 |
| 4. 藻类褐藻胶生物合成途径研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 藻类褐藻胶生物合成基因分析 | 第34-70页 |
| 1. 生物信息学和系统进化分析方法 | 第34-35页 |
| 1.1 OneKP 转录组数据库和海带基因组数据库搜索 | 第34页 |
| 1.2 褐藻胶生物合成途径基因分析方法 | 第34-35页 |
| 1.2.1 生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 1.2.2 多序列比对以及系统进化树的构建 | 第35页 |
| 2. 数据分析结果 | 第35-63页 |
| 2.1 褐藻胶合成通路基因转录组以及基因组搜索结果 | 第35-36页 |
| 2.2 PMI 和 MPG 基因分析结果 | 第36-42页 |
| 2.2.1 PMI 基因数据库注释结果 | 第36-37页 |
| 2.2.2 MPG 基因数据库注释结果 | 第37页 |
| 2.2.3 同源性分析和保守性结构域分析 | 第37-39页 |
| 2.2.4 三维结构预测 | 第39-41页 |
| 2.2.5 系统进化分析结果 | 第41-42页 |
| 2.3 PMM 基因分析结果 | 第42-49页 |
| 2.3.1 PMM 基因数据库注释结果 | 第42-44页 |
| 2.3.2 PMM 基因结构分析 | 第44页 |
| 2.3.3 PMM 基因同源性分析和和保守结构域预测 | 第44-46页 |
| 2.3.4 三维结构预测 | 第46-47页 |
| 2.3.5 PMM 基因系统进化分析结果 | 第47-49页 |
| 2.4 UGD/GMD 基因分析结果 | 第49-54页 |
| 2.4.1 UGD/GMD 基因数据库注释结果 | 第49页 |
| 2.4.2 褐藻内 UGD/GMD 基因分型和结构分析 | 第49-51页 |
| 2.4.3 同源性分析和保守结构域分析 | 第51-52页 |
| 2.4.4 三级结构分析 | 第52-53页 |
| 2.4.5 系统发生学分析 | 第53-54页 |
| 2.5 algG 基因分析结果 | 第54-63页 |
| 2.5.1 algG 基因搜索结果 | 第54-55页 |
| 2.5.2 algG 基因结构和基因排布分析 | 第55-58页 |
| 2.5.3 algG 基因同源性和结构域分析 | 第58页 |
| 2.5.4 三级结构分析 | 第58-59页 |
| 2.5.5 系统发生学分析结果 | 第59-63页 |
| 3. 讨论 | 第63-70页 |
| 3.1 藻类褐藻胶的生物合成 | 第63-66页 |
| 3.1.1 藻类褐藻胶前体物质 GDP-甘露糖醛酸（GDP-mannuronic acid）的合成 | 第63-65页 |
| 3.1.2 藻类褐藻胶合成通路后端基因 | 第65-66页 |
| 3.2 褐藻胶合成通路基因的多拷贝和串联重复现象 | 第66-68页 |
| 3.3 褐藻胶合成通路基因的分布以及其系统进化 | 第68-70页 |
| 第三章 海带 Sja-PMM 基因和 Sja-algG 基因克隆、原核表达和真核表达 | 第70-97页 |
| 1. 实验材料 | 第70-74页 |
| 1.1 海带样品 | 第70页 |
| 1.2 试剂、试剂盒和主要仪器 | 第70-71页 |
| 1.3 菌株和质粒 | 第71页 |
| 1.4 主要试剂的配置方法 | 第71-74页 |
| 2. 实验方法 | 第74-84页 |
| 2.1 海带配子体 RNA 的提取和总 RNA 的反转录 | 第74-75页 |
| 2.1.1 海带配子体 RNA 的提取 | 第74-75页 |
| 2.1.2 海带 cDNA 第一链的合成 | 第75页 |
| 2.2 海带 SjPMM 和 algG 基因的 CDS 序列的扩增 | 第75-76页 |
| 2.2.1 海带 Sj-PMM 和 Sj-algG 基因特异性引物设计 | 第75-76页 |
| 2.2.2 特异性引物 TD-PCR 扩增 | 第76页 |
| 2.3 PCR 产物的回收和目的基因的克隆测序 | 第76页 |
| 2.3.1 PCR 产物回收 | 第76页 |
| 2.3.2 目的基因的克隆测序 | 第76页 |
| 2.4 原核表达 | 第76-81页 |
| 2.4.1 原核表达载体 pET32a-Sj-PMM、pET32a-Sj-algG 的构建 | 第76-78页 |
| 2.4.2 重组质粒 pET32a-Sj-PMM、pET32a-Sj-algG 转化至 BL21 表达载体 | 第78页 |
| 2.4.3 融合蛋白 His-Sja-PMM 和 His-Sja-AlgG 的诱导表达 | 第78页 |
| 2.4.4 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Weastern-blot 检测 | 第78-80页 |
| 2.4.5 重组蛋白 His- PMM、His- AlgG 的纯化和透析 | 第80-81页 |
| 2.5 真核表达 | 第81-84页 |
| 2.5.1 pPICZαA-algG 表达载体的构建 | 第81-82页 |
| 2.5.2 质粒的线性化和纯化 | 第82页 |
| 2.5.3 巴斯德毕赤酵母 X-33 感受态细胞的制备 | 第82-83页 |
| 2.5.4 将目的片段电击转化至巴斯德毕赤酵母 X-33 | 第83页 |
| 2.5.5 PCR 检测转化后重组子 | 第83-84页 |
| 2.5.5.1 PCR 模板制备 | 第83-84页 |
| 2.5.5.2 PCR 检测阳性克隆 | 第84页 |
| 2.5.6 毕赤酵母 X-33 中 pPICZαA-algG 的诱导和表达 | 第84页 |
| 2.5.7 Ni 柱纯化和透析 | 第84页 |
| 3. 实验结果及分析 | 第84-95页 |
| 3.1 真海带配子体 RNA 的提取结果 | 第84-85页 |
| 3.2 海带 Sj-PMM 基因和 Sj-algG 基因 CDS 扩增结果 | 第85页 |
| 3.3 海带 Sja-PMM 基因和 Sja-algG 基因全长的扩增 | 第85-86页 |
| 3.4 pET32a-Sja-PMM 和 pET32a-Sja-algG 表达载体的构建 | 第86-87页 |
| 3.5 pET32a-Sja-PMM 和 pET32a-Sja-algG 质粒转化至表达菌株 BL21 | 第87-88页 |
| 3.6 His-algG 融合蛋白诱导表达 | 第88-92页 |
| 3.6.1 pET32a-Sja-algG 不同诱导条件的筛选 | 第88-90页 |
| 3.6.2 pET32a-Sja-PMM 的诱导表达 | 第90-91页 |
| 3.6.3 Ni 柱纯化重组蛋白 | 第91-92页 |
| 3.7 原核表达 Western-Blot 检测结果 | 第92页 |
| 3.8 pPICZαA-Sja-algG 表达载体的构建 | 第92-93页 |
| 3.9 pPICZαA- Sj-algG 电转化至巴斯德毕赤酵母 X-3378 | 第93-94页 |
| 3.10 Sj-AlgG 蛋白在巴斯德毕赤酵母 X-33 诱导表达 | 第94-95页 |
| 4. 讨论 | 第95-97页 |
| 第四章 海带 Sja-PMI4 蛋白和 PMM 蛋白的酶促反应动力学研究.82 | 第97-118页 |
| 1. 实验材料 | 第97页 |
| 1.1 蛋白样品 | 第97页 |
| 1.2 试剂和主要仪器 | 第97页 |
| 1.3 主要试剂的配置方法 | 第97页 |
| 2. 实验方法 | 第97-101页 |
| 2.1 Sja-PMI4 的活性检测 | 第97-99页 |
| 2.1.1 酶活力的测定 | 第97-98页 |
| 2.1.2 重组 Sja-PMI4 蛋白 MPG 酶活性 | 第98-99页 |
| 2.2 Sja-PMM 蛋白的活性检测 | 第99-101页 |
| 2.2.1 PMM 和 PGM 酶活性测定 | 第99-100页 |
| 2.2.2 重组 Sja-PMM 蛋白 PMM 和 PGM 酶活性 | 第100-101页 |
| 2.3 数据分析 | 第101页 |
| 3. 结果与分析 | 第101-111页 |
| 3.1 Sja-PMI4 酶学性质研究 | 第101-105页 |
| 3.1.1 反应时间对酶活性的影响 | 第101-102页 |
| 3.1.2 温度对酶活性的影响 | 第102-103页 |
| 3.1.3 酸碱度 pH 对酶活性的影响 | 第103-104页 |
| 3.1.4 金属离子对酶活性的影响 | 第104页 |
| 3.1.5 酶促反应动力学参数的计算 | 第104-105页 |
| 3.2 Sja-PMM 酶学性质研究 | 第105-111页 |
| 3.2.1 反应时间对酶活性的影响 | 第105-106页 |
| 3.2.2 温度对酶活性的影响 | 第106-107页 |
| 3.2.3 酸碱度 pH 对酶活性的影响 | 第107-109页 |
| 3.2.4 金属离子对酶活性的影响 | 第109-110页 |
| 3.2.5 酶促反应动力学参数的计算 | 第110-111页 |
| 4. 讨论 | 第111-118页 |
| 4.1 真海带 Sja-PMI4 蛋白的 MPG 酶活性检测 | 第111-113页 |
| 4.1.1 藻类中 PMI/MPG 双功能基因的发现 | 第111-112页 |
| 4.1.2 藻类中 Sja-PMI4 蛋白的酶学性质 | 第112-113页 |
| 4.2 真海带 Sja-PMM 蛋白酶活性检测 | 第113-118页 |
| 4.2.1 藻类中 PMM 蛋白的酶学研究现状 | 第113-114页 |
| 4.2.2 藻类中 Sja-PMM 蛋白的酶学性质 | 第114-118页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 附录 | 第129-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 个人简历 | 第135页 |
| 发表的学术论文 | 第135-136页 |
