| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第17-24页 |
| 1.1 卡尔文循环及其相关酶 | 第17-19页 |
| 1.2 果糖-1,6-二磷酸醛缩酶 | 第19-23页 |
| 1.2.1 FBA的性质 | 第20页 |
| 1.2.2 植物中FBA基因克隆及表达特性 | 第20-22页 |
| 1.2.3 FBA的功能分析 | 第22-23页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-49页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第25-26页 |
| 2.2 试验设计 | 第26-27页 |
| 2.2.1 FBA基因表达特性研究 | 第26页 |
| 2.2.2 FBA对温度胁迫的响应 | 第26页 |
| 2.2.3 FBA基因遗传转化及功能分析 | 第26-27页 |
| 2.3 试验方法 | 第27-48页 |
| 2.3.1 SlFBAs家族的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.3.1.1 数据收集及SlFBAs家族成员的鉴定 | 第27页 |
| 2.3.1.2 同源进化分析 | 第27-28页 |
| 2.3.1.3 结构域及基因结构分析 | 第28页 |
| 2.3.1.4 基因在染色体上的分布及线性分析 | 第28页 |
| 2.3.2 总RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| 2.3.4 SlFBA4及SlFBA7基因扩增 | 第29-32页 |
| 2.3.4.1 全长cDNA的克隆 | 第29-30页 |
| 2.3.4.2 PCR产物回收 | 第30-31页 |
| 2.3.4.3 目的基因的连接与转化 | 第31-32页 |
| 2.3.4.4 提取质粒DNA | 第32页 |
| 2.3.4.5 DNA序列分析 | 第32页 |
| 2.3.5 表达载体构建 | 第32-34页 |
| 2.3.5.1 过表达载体构建 | 第32-33页 |
| 2.3.5.2 RNAi表达载体构建 | 第33-34页 |
| 2.3.6 农杆菌介导转化番茄 | 第34-35页 |
| 2.3.6.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 2.3.6.2 电击法转化农杆菌 | 第34-35页 |
| 2.3.6.3 农杆菌介导转化番茄 | 第35页 |
| 2.3.7 转基因植株的PCR检测 | 第35-37页 |
| 2.3.7.1 基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.7.2 基因组DNA的检测 | 第36-37页 |
| 2.3.8 Western杂交 | 第37-38页 |
| 2.3.8.1 抗体的制备 | 第37页 |
| 2.3.8.2 Western杂交 | 第37-38页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR | 第38-40页 |
| 2.3.9.1 植物总RNA的提取 | 第38页 |
| 2.3.9.2 反转录反应 | 第38页 |
| 2.3.9.3 基因表达 | 第38-40页 |
| 2.3.10 光合酶活性的测定 | 第40-45页 |
| 2.3.10.1 果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA) | 第40-41页 |
| 2.3.10.2 RuBP羧化酶(RuBPCase) | 第41页 |
| 2.3.10.3 景天庚酮糖-1,7-二磷酸酯酶(SBPase) | 第41-42页 |
| 2.3.10.4 果糖-1,6-二磷酸酯酶(FBPase) | 第42-43页 |
| 2.3.10.5 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) | 第43-44页 |
| 2.3.10.6 转酮醇酶(TK) | 第44-45页 |
| 2.3.11 转基因番茄生长及生理指标的测定 | 第45-48页 |
| 2.3.11.1 生长指标 | 第45页 |
| 2.3.11.2 种子发芽率 | 第45页 |
| 2.3.11.3 气体交换参数 | 第45页 |
| 2.3.11.4 叶绿素荧光参数 | 第45页 |
| 2.3.11.5 可溶性糖含量 | 第45-46页 |
| 2.3.11.6 淀粉含量 | 第46页 |
| 2.3.11.7 蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性 | 第46页 |
| 2.3.11.8 H_2O_2含量及组织化学染色 | 第46-47页 |
| 2.3.11.9 O_2~(.-)产生速率及组织化学染色 | 第47-48页 |
| 2.3.11.10 丙二醛含量 | 第48页 |
| 2.4 数据分析 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-96页 |
| 3.1 番茄FBA基因家族(SlFBAs)生物信息学分析 | 第49-57页 |
| 3.1.1 SlFBAs基因家族的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.1.2 SlFBAs基因家族的同源进化分析 | 第50-54页 |
| 3.1.3 SlFBAs染色体定位、基因复制事件及线性分析 | 第54-56页 |
| 3.1.4 SlFBAs基因结构分析 | 第56-57页 |
| 3.2 番茄SlFBAs的表达特性 | 第57-63页 |
| 3.2.1 SlFBAs在不同组织中的表达 | 第57-58页 |
| 3.2.2 SlFBAs在不同叶位叶片中的表达 | 第58-59页 |
| 3.2.3 不同叶位叶片中FBA活性与Pn | 第59-60页 |
| 3.2.4 番茄叶片Pn、FBA活性与SlFBAs表达的日变化 | 第60-62页 |
| 3.2.5 番茄幼苗FBA与光合速率对低温弱光的响应 | 第62页 |
| 3.2.6 番茄幼苗FBA与光合速率对高温的响应 | 第62-63页 |
| 3.3 SlFBA4和SlFBA7在番茄中的遗传转化 | 第63-67页 |
| 3.3.1 基因克隆 | 第63-64页 |
| 3.3.2 过表达载体构建 | 第64-65页 |
| 3.3.3 RNAi表达载体的构建 | 第65-67页 |
| 3.3.3.1 SlFBA4和SlFBA7片段的克隆 | 第65-66页 |
| 3.3.3.2 SlFBA4和SlFBA7RNAi表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 3.4 遗传转化及转基因植株的分子鉴定 | 第67-74页 |
| 3.5 转基因番茄的生长发育特性 | 第74-77页 |
| 3.6 转基因番茄的光合特性 | 第77-86页 |
| 3.6.1 转基因番茄的净光合速率 | 第77-78页 |
| 3.6.2 SlFBAs过表达和RNA干扰对卡尔文循环相关酶基因表达及活性的影响 | 第78-86页 |
| 3.7 转基因番茄的糖代谢 | 第86-88页 |
| 3.8 转基因番茄耐冷性 | 第88-96页 |
| 3.8.1 低温弱光下转基因番茄幼苗的SlFBAs基因表达及酶活性变化 | 第88-90页 |
| 3.8.2 低温弱光对转基因番茄幼苗光合速率的影响 | 第90-92页 |
| 3.8.3 低温弱光下转基因番茄幼苗的光化学效率 | 第92页 |
| 3.8.4 低温弱光下转基因番茄幼苗的丙二醛(MDA)含量 | 第92-94页 |
| 3.8.5 低温弱光对转基因番茄H_2O_2含量和O_2~(.-)产生速率的影响 | 第94-96页 |
| 4 讨论 | 第96-101页 |
| 4.1 番茄FBA基因家族特性 | 第96页 |
| 4.2 番茄FBA基因的同源进化分析 | 第96-97页 |
| 4.3 日光温室番茄FBA活性及基因表达特性与光合速率的关系 | 第97-98页 |
| 4.4 SlFBA4和SlFBA7对番茄叶片的光合作用及生长发育的调控 | 第98-99页 |
| 4.5 SlFBAs与番茄低温弱光耐性的关系 | 第99-101页 |
| 5 结论 | 第101-102页 |
| 6 参考文献 | 第102-115页 |
| 7 附录 | 第115-119页 |
| 8 致谢 | 第119-121页 |
| 9 攻读学位期间发表的论文 | 第121页 |
