| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 双功能融合蛋白的构建和表达 | 第14-33页 |
| 一、材料 | 第14-15页 |
| (一) 细胞系 | 第14页 |
| (二) 载体 | 第14页 |
| (三) 引物 | 第14-15页 |
| (四) 工具酶 | 第15页 |
| (五) 试剂盒 | 第15页 |
| (六) 主要仪器设备 | 第15页 |
| 二、方法 | 第15-18页 |
| (一) FlexFc 表达载体的构建 | 第15-16页 |
| (二) CD20scFvCH-FlexCL 表达载体的构建 | 第16页 |
| (三) FlexFc-CD20scFv 表达载体的构建 | 第16-17页 |
| (四) 转染、筛选及蛋白表达、纯化和鉴定 | 第17-18页 |
| 三、结果 | 第18-31页 |
| (一) FlexFc 基因的构建 | 第18-20页 |
| (二) CD20scFvCH-FlexCL 基因的构 | 第20-24页 |
| (三) FlexFc-CD20scFv 基因的构建 | 第24-27页 |
| (四) 表达载体的构建（以FlexFc 为例） | 第27-28页 |
| (五) 瞬时转染鉴定 | 第28页 |
| (六) 稳定转染及理化性质检测 | 第28-31页 |
| 四、讨论 | 第31-33页 |
| 第二部分 双功能融合蛋白体外功能鉴定 | 第33-55页 |
| 一、材料 | 第33-34页 |
| (一) 细胞系 | 第33页 |
| (二) 主要试剂 | 第33页 |
| (三) 实验器材 | 第33-34页 |
| 二、方法 | 第34-40页 |
| (一) 双功能融合蛋白与CD20 的结合活性 | 第34-35页 |
| (二) 双功能融合蛋白诱导CD20+细胞的CDC 效应 | 第35-36页 |
| (三) 双功能融合蛋白诱导CD20+细胞的ADCC 效应 | 第36-38页 |
| (四) 双功能融合蛋白Flex 免疫活性的测定 | 第38-39页 |
| (五) 双功能融合蛋白Flex 生物活性的测定 | 第39-40页 |
| 三、结果 | 第40-54页 |
| (一) 双功能融合蛋白与CD20 的结合活性 | 第40-43页 |
| (二) 双功能融合蛋白诱导CD20+细胞的CDC 效应 | 第43-48页 |
| (三) 双功能融合蛋白诱导CD20+细胞的ADCC 效应 | 第48-52页 |
| (四) 双功能融合蛋白Flex 免疫活性的测定 | 第52-53页 |
| (五) 双功能融合蛋白Flex 生物活性的测定 | 第53-54页 |
| 四、讨论 | 第54-55页 |
| 第三部分 CD205cFvCH-FlexCL 抗肿瘤作用及机理 | 第55-66页 |
| 一、材料 | 第55-56页 |
| (一) 细胞系 | 第55页 |
| (二) 实验动物 | 第55页 |
| (三) 主要试剂 | 第55页 |
| (四) 实验器材 | 第55-56页 |
| 二、方法 | 第56-58页 |
| (一) 双功能融合蛋白体内分布研究 | 第56页 |
| (二) 双功能融合蛋白抗肿瘤作用研究 | 第56页 |
| (三) 免疫细胞亚群的效应研究 | 第56-57页 |
| (四) 特异性抗肿瘤免疫反应研究 | 第57-58页 |
| 三、结果 | 第58-63页 |
| (一) 双功能融合蛋白体内分布 | 第58页 |
| (二) 双功能融合蛋白抗肿瘤作用 | 第58-61页 |
| (三) 免疫细胞亚群的效应 | 第61-62页 |
| (四) 特异性抗肿瘤免疫反应 | 第62-63页 |
| 四、讨论 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 综述：抗CD20 抗体和FLT3L | 第70-86页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
