| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-12页 |
| 1.1 选题的背景及意义 | 第9-10页 |
| 1.2 主要研究内容及技术路线 | 第10-12页 |
| 1.2.1 主要研究内容 | 第10-11页 |
| 1.2.2 技术路线 | 第11-12页 |
| 第二章 文献综述 | 第12-30页 |
| 2.1 竹种质资源概述 | 第12-13页 |
| 2.2 CBF1转录因子的研究进展 | 第13-18页 |
| 2.2.1 CBF1基因的发现 | 第13-14页 |
| 2.2.2 CBF1转录因子的结构与特性 | 第14-15页 |
| 2.2.3 CBF1转录因子的表达 | 第15-18页 |
| 2.2.4 CBF1转录因子在提高植物耐逆性中的作用 | 第18页 |
| 2.3 RACE技术 | 第18-19页 |
| 2.4 RNAI的研究方法及其在植物中的应用 | 第19-22页 |
| 2.4.1 RNAi的研究方法 | 第19-20页 |
| 2.4.2 RNAi在植物中的应用 | 第20-22页 |
| 2.5 植物遗传转化 | 第22-23页 |
| 2.5.1 植物遗传转化方法 | 第22页 |
| 2.5.2 基因的遗传转化与基因功能验证 | 第22-23页 |
| 2.6 植物的耐寒生理 | 第23-30页 |
| 2.6.1 生理生化变化对植物抗寒性的关系 | 第24-28页 |
| 2.6.2 植物形态解剖结构与抗寒的关系 | 第28-30页 |
| 第三章 RACE法克隆慈竹CBF1基因 | 第30-58页 |
| 3.1 供试材料、菌种、主要试剂和仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.1 供试材料、菌种 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第30-31页 |
| 3.2 方法 | 第31-45页 |
| 3.2.1 慈竹叶片总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 3.2.2 慈竹CBF1基因保守区的克隆与测序 | 第32-36页 |
| 3.2.3 慈竹CBF1基因5’RACE克隆与测序 | 第36-39页 |
| 3.2.4 慈竹CBF1基基3’RACE的克隆与测序 | 第39-43页 |
| 3.2.5 慈竹CBF1全长基因的克隆与测序 | 第43-45页 |
| 3.2.6 慈竹CBF1基因的生物信息学分析 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-56页 |
| 3.3.1 慈竹叶片总RNA的提取与鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 慈竹CBF1基因的RACE技术克隆 | 第46-47页 |
| 3.3.4 慈竹CBF1基因的5’RACE和3’RACE扩增产物的鉴定 | 第47页 |
| 3.3.5 慈竹CBF1基因5’RACE的扩增产物的生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 3.3.6 慈竹CBF1基因3’RACE的扩增产物的生物信息学分析 | 第48-51页 |
| 3.3.7 慈竹CBF1基因全长序列的生物信息学分析 | 第51-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 慈竹CBF1基因表达载体构建 | 第58-69页 |
| 4.1 供试材料、菌种、主要试剂和仪器 | 第58页 |
| 4.1.1 供试材料、菌种 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-63页 |
| 4.2.1 慈竹叶片总RNA的提取 | 第58-59页 |
| 4.2.2 慈竹CBF1基因的克隆与测序 | 第59页 |
| 4.2.3 慈竹CBF1基因植物表达载体的构建 | 第59页 |
| 4.2.4 慈竹CBF1基因RNAi的克隆与测序 | 第59-62页 |
| 4.2.5 中间表达载体pSK-NaCBF1-RNAi的构建 | 第62-63页 |
| 4.2.6 慈竹CBF1基因植物表达载体的构建 | 第63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-67页 |
| 4.3.1 慈竹CBF1基因的PCR扩增 | 第63-64页 |
| 4.3.2 慈竹CBF1基因的验证 | 第64页 |
| 4.3.3 慈竹CBF1基因植物过表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 4.3.4 慈竹CBF1 RNAi 目标片段的扩增 | 第65页 |
| 4.3.5 慈竹CBF1 RNAi 目标片段的克隆 | 第65-66页 |
| 4.3.6 中间表达载体pSK-NaCBF1-RNAi的构建与鉴定 | 第66-67页 |
| 4.3.7 植物表达载体pBI-NaCBF1-RNAi的构建与鉴定 | 第67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-68页 |
| 4.5 小结 | 第68-69页 |
| 第五章 慈竹CBF1基因在烟草中过量表达 | 第69-107页 |
| 5.1 供试材料、菌种和主要试剂、仪器等 | 第69-70页 |
| 5.1.1 供试材料、菌种 | 第69-70页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第70页 |
| 5.1.3 处理 | 第70页 |
| 5.2 试验方法 | 第70-77页 |
| 5.2.1 pBI-NaCBF1质粒转化农杆菌EHA105 | 第70-71页 |
| 5.2.2 叶盘法转化烟草 | 第71-72页 |
| 5.2.3 抗性再生植株的分化生根筛选 | 第72页 |
| 5.2.4 转基因烟草植株的验证 | 第72-74页 |
| 5.2.5 T_1代转基因烟草幼苗的形态变化 | 第74-75页 |
| 5.2.6 T_2代转基因烟草植株的形态变化 | 第75页 |
| 5.2.7 过表达NaCBF1基因对T_2代转基因烟草植株耐寒性的测定 | 第75-77页 |
| 5.2.8 数据分析 | 第77页 |
| 5.3 结果分析 | 第77-103页 |
| 5.3.1 pBI-NaCBF1质粒转化农杆菌 | 第77页 |
| 5.3.2 T_0代转基因烟草NPTⅡ基因的PCR检测 | 第77-79页 |
| 5.3.4 T_1代转基因烟草幼苗的形态变化 | 第79-80页 |
| 5.3.5 T_2转基因烟草幼苗的形态变化 | 第80-81页 |
| 5.3.6 T_2代转基因烟草植株表达的半定量RT-PCR和实时定量RT-PCR | 第81页 |
| 5.3.7 4℃低温胁迫对过表达NaCBF1转基因烟草叶片的叶绿素荧光参数的影响 | 第81-88页 |
| 5.3.8 0℃低温胁迫对过表达NaCBF1的转基因烟草叶片的叶绿素荧光参数的影响 | 第88-94页 |
| 5.3.9 -2℃抗冻胁迫对过表达NaCBF1转基因烟草植株叶片的叶绿素荧光参数的影响 | 第94页 |
| 5.3.10 不同温度处理对过表达NaCBF1转基因烟草植株叶片相对电导率(Relative conductity,RC)及MDA含量的影响 | 第94-96页 |
| 5.3.11 不同温度处理对过表达NaCBF1转基因烟草植株叶片抗氧化酶系统活性的影响 | 第96-99页 |
| 5.3.12 不同温度处理对过表达NaCBF1转基因烟草植株叶片脯氨酸(Proline)和可溶性糖(Sobule sugar,SS)含量的影响 | 第99-100页 |
| 5.3.13 各项指标相关性分析 | 第100-103页 |
| 5.3.14 不同温度胁迫下T_2代转基因烟草的半定量RT-PCR | 第103页 |
| 5.4 讨论 | 第103-105页 |
| 5.5 小结 | 第105-107页 |
| 结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第117页 |
