| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 猪水肿病的毒力因子 | 第11-15页 |
| 1.1 肠道毒素 | 第11-14页 |
| 1.2 F18菌毛 | 第14-15页 |
| 2 λ噬菌体的Red同源重组系统 | 第15-19页 |
| 研究一、致猪水肿病大肠杆菌标准株1522、1525 Stx2e基因缺失突变株的构建 | 第19-36页 |
| 摘要 | 第19页 |
| Abstract | 第19-21页 |
| 1. 材料 | 第21-23页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第22页 |
| 1.2 培养基和主要试剂及配制 | 第22页 |
| 1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2. 方法 | 第23-29页 |
| 2.1 致猪水肿病大肠杆菌标准株1522抗性和毒素的检测 | 第23页 |
| 2.2 PCR引物的设计 | 第23页 |
| 2.3 融合PCR产物的制备和纯化 | 第23-25页 |
| 2.4 感受态细胞的制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.5 质粒pKD46的消除 | 第26页 |
| 2.6 第一次同源重组菌△Stx2e::Cat的PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.7 FLP位点专一性重组 | 第26-27页 |
| 2.8 第二次重组菌△Stx2e的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.9 互补株的构建及验证 | 第28-29页 |
| 2.10 在细胞水平上验证Stx2e基因的缺失 | 第29页 |
| 2.11 1522△Stx2e基因缺失株及互补株的稳定性检测 | 第29页 |
| 2.12 大肠杆菌1525株Stx2e基因缺失突变株的构建 | 第29页 |
| 3. 结果 | 第29-34页 |
| 3.1 致猪水肿病大肠杆菌标准株1522抗性和毒素的检测 | 第29-30页 |
| 3.2 融合PCR产物的制备 | 第30页 |
| 3.3 同源重组菌△Stx2e::Cat的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 3.4 第二次重组菌1522△Stx2e鉴定 | 第31页 |
| 3.5 对1522△Stx2e菌株基因组进行序列分析 | 第31-32页 |
| 3.6 互补株的构建及验证 | 第32-34页 |
| 3.7 在细胞水平上验证1522株Stx2e基因的缺失 | 第34页 |
| 3.8 1522Stx2e基因缺失株及缺失回补株的稳定性检测 | 第34页 |
| 4. 讨论 | 第34-36页 |
| 研究二、致猪水肿病大肠杆菌1522△Stx2e基因缺失突变株的相关功能性分析 | 第36-42页 |
| 摘要 | 第36页 |
| Abstract | 第36-37页 |
| 1. 材料 | 第37页 |
| 1.1 相关菌株和制品 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂及配制 | 第37页 |
| 1.3 仪器设备 | 第37页 |
| 2. 方法 | 第37-38页 |
| 2.1 细菌的生化鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2 生长试验 | 第38页 |
| 2.3 粘附试验 | 第38页 |
| 2.4 将1522Stx2e基因缺失株作为基因表达载体的初步探索 | 第38页 |
| 3. 结果 | 第38-41页 |
| 3.1 细菌的生长和生化实验 | 第38-39页 |
| 3.2 突变株的生长曲线测定 | 第39页 |
| 3.3 Stx2e基因缺失对大肠杆菌1522株粘附细胞能力的影响 | 第39-40页 |
| 3.4 将1522Stx2e基因缺失株作为基因表达载体的初步探索 | 第40-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-42页 |
| 全文小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
