| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 课题提出和前人研究进展 | 第15-26页 |
| 1.1 课题的提出 | 第15-17页 |
| 1.2 前人研究进展 | 第17-25页 |
| 1.2.1 柿单宁 | 第17-21页 |
| 1.2.1.1 柿单宁分类 | 第17页 |
| 1.2.1.2 柿单宁生物合成 | 第17-19页 |
| 1.2.1.3 柿单宁转录调控 | 第19-20页 |
| 1.2.1.4 柿果脱涩 | 第20-21页 |
| 1.2.2 目的基因的分离策略 | 第21-25页 |
| 1.2.2.1 PCR扩增 | 第22页 |
| 1.2.2.2 转录水平差异显示 | 第22-23页 |
| 1.2.2.3 图位克隆 | 第23页 |
| 1.2.2.4 转座子或T-DNA标签技术 | 第23-24页 |
| 1.2.2.5 基于核苷酸测序技术的基因克隆 | 第24页 |
| 1.2.2.6 基于特异蛋白的基因克隆 | 第24-25页 |
| 1.3 研究目的和研究内容 | 第25-26页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 柿果温水脱涩研究及差异cDNA文库构建 | 第26-60页 |
| 2.1 前言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料和方法 | 第27-39页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第27页 |
| 2.2.2 单宁含量的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 相关试剂及其配制方法 | 第27页 |
| 2.2.2.2 Folin-Ciocalteu法 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 印迹法 | 第28页 |
| 2.2.3 总DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 总RNA提取 | 第29页 |
| 2.2.5 cDNA合成 | 第29-32页 |
| 2.2.5.1 单链cDNA合成 | 第29-30页 |
| 2.2.5.2 双链cDNA合成 | 第30-32页 |
| 2.2.6 实时定量PCR | 第32页 |
| 2.2.7 cDNA/gDNA-SSAP技术体系及程序 | 第32-35页 |
| 2.2.7.1 cDNA/gDNA双酶切 | 第32-33页 |
| 2.2.7.2 接头连接 | 第33-34页 |
| 2.2.7.3 cDNA/gDNA-SSAP预扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.7.4 cDNA/gDNA-SSAP选择性扩增 | 第35页 |
| 2.2.7.5 选择性扩增产物电泳检测 | 第35页 |
| 2.2.8 差异条带的分离及克隆测序 | 第35-38页 |
| 2.2.8.1 差异条带的分离 | 第35页 |
| 2.2.8.2 差异条带的扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.8.3 目的条带的切胶回收 | 第36页 |
| 2.2.8.4 目的条带与载体连接 | 第36-37页 |
| 2.2.8.5 转化感受态细胞 | 第37页 |
| 2.2.8.6 单克隆增殖 | 第37页 |
| 2.2.8.7 阳性检测与测序 | 第37-38页 |
| 2.2.9 水溶性果胶（WSP）含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.9.1 相关试剂及其配制方法 | 第38页 |
| 2.2.9.2 咔唑比色法 | 第38-39页 |
| 2.2.10 SOD、POD、CAT酶活的测定 | 第39页 |
| 2.2.11 数据分析 | 第39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-52页 |
| 2.3.1 柿果温水处理过程中单宁含量的变化 | 第39-41页 |
| 2.3.2 柿果温水处理过程中SOD、POD及CAT酶活的变化 | 第41-42页 |
| 2.3.3 柿逆转座子DkRE1分布特性研究 | 第42页 |
| 2.3.4 柿果温水处理过程中逆转座子DkRE1的激活与转座 | 第42-43页 |
| 2.3.5 柿果温水处理过程中cDNA/gDNA-SSAP条带分析 | 第43-45页 |
| 2.3.6 柿果温水处理过程中cDNA/gDNA-SSAP差异条带克隆及功能注释 | 第45-48页 |
| 2.3.7 候选基因片段在‘鄂柿1号’温水脱涩过程中的表达变化 | 第48-50页 |
| 2.3.8 候选基因片段在‘磨盘柿’温水脱涩过程中的表达变化 | 第50-52页 |
| 2.3.9 柿果温水脱涩过程中水溶性果胶的含量变化 | 第52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-60页 |
| 2.4.1 温水脱涩对柿果中逆转座子活性的影响 | 第52-53页 |
| 2.4.2 温水脱涩对柿单宁前体生物合成及跨膜转运的影响 | 第53-55页 |
| 2.4.3 醛类在柿果温水脱涩过程中的可能作用 | 第55-57页 |
| 2.4.4 果胶在柿果温水脱涩过程中的可能作用 | 第57-60页 |
| 第三章 中国甜柿自然脱涩相关基因DkPK的筛选及鉴定 | 第60-81页 |
| 3.1 前言 | 第60-61页 |
| 3.2 材料与方法 | 第61-70页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第61页 |
| 3.2.2 单宁含量测定 | 第61页 |
| 3.2.2.1 果肉单宁含量测定 | 第61页 |
| 3.2.2.2 叶片单宁含量测定 | 第61页 |
| 3.2.3 总RNA提取 | 第61页 |
| 3.2.4 cDNA合成 | 第61-62页 |
| 3.2.4.1 用于qRT-PCR的单链cDNA合成 | 第61-62页 |
| 3.2.4.2 用于基因分离的单链cDNA合成 | 第62页 |
| 3.2.5 DkPK全长cDNA的分离 | 第62-67页 |
| 3.2.5.1 cDNA片段的获取 | 第62页 |
| 3.2.5.2 染色体步移 | 第62-65页 |
| 3.2.5.3 3’RACE | 第65-66页 |
| 3.2.5.4 cDNA全长克隆 | 第66-67页 |
| 3.2.6 实时定量PCR | 第67页 |
| 3.2.7 DkPK1的亚细胞定位 | 第67-69页 |
| 3.2.7.1 载体构建 | 第67-68页 |
| 3.2.7.2 瞬时表达 | 第68-69页 |
| 3.2.8 柿叶片瞬时超表达 | 第69-70页 |
| 3.2.8.1 载体构建 | 第69页 |
| 3.2.8.2 瞬时表达 | 第69-70页 |
| 3.3 结果与分析 | 第70-76页 |
| 3.3.1 不同柿品种果实发育过程中单宁含量的变化 | 第70页 |
| 3.3.2 6 个DkPK在中国甜柿中的分离及序列分析 | 第70-72页 |
| 3.3.3 6 个DkPK在不同柿品种果实发育过程中的表达变化 | 第72-73页 |
| 3.3.4 DkPK1在中国甜柿种子中的高度表达 | 第73-74页 |
| 3.3.5 DkPK1在烟草叶片中的亚细胞定位 | 第74-75页 |
| 3.3.6 超表达DkPK1对‘磨盘柿’叶片中可溶性单宁含量的影响 | 第75页 |
| 3.3.7 超表达DkPK1对‘磨盘柿’叶片中DkPDC表达的影响 | 第75-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-81页 |
| 3.4.1 中国甜柿自然脱涩相关基因的筛选 | 第76-78页 |
| 3.4.2 DkPK1在中国甜柿自然脱涩过程中的可能作用 | 第78-79页 |
| 3.4.3 中国甜柿自然脱涩模型的推测 | 第79-81页 |
| 第四章 应用酵母单杂交系统筛选DkPK1和DkCAD1互作转录因子 | 第81-92页 |
| 4.1 前言 | 第81-82页 |
| 4.2 材料与方法 | 第82-86页 |
| 4.2.1 试验材料 | 第82页 |
| 4.2.2 总DNA提取 | 第82页 |
| 4.2.3 启动子序列获取 | 第82-83页 |
| 4.2.3.1 染色体步移 | 第82页 |
| 4.2.3.2 启动子克隆 | 第82-83页 |
| 4.2.4 诱饵载体pAbAi-PK/CAD构建 | 第83-84页 |
| 4.2.5 酵母菌株感受态制备 | 第84-85页 |
| 4.2.6 诱饵菌株构建及阳性检测 | 第85页 |
| 4.2.7 诱饵菌株AbA毒性检测 | 第85-86页 |
| 4.2.8 酵母文库筛选 | 第86页 |
| 4.3 结果与分析 | 第86-89页 |
| 4.3.1 启动子获取及诱饵载体构建 | 第86页 |
| 4.3.2 诱饵菌株毒性检测 | 第86-88页 |
| 4.3.3 酵母文库筛选 | 第88-89页 |
| 4.3.4 互作转录因子生物信息学分析 | 第89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-92页 |
| 4.4.1 基于酵母文库筛选目的基因互作蛋白 | 第89-90页 |
| 4.4.2 中国甜柿自然脱涩转录调控 | 第90-92页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第92-94页 |
| 5.1 总结 | 第92-93页 |
| 5.2 创新之处 | 第93页 |
| 5.3 进一步工作设想 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 附录 | 第110-120页 |
| 作者简历及在学期间的科研实践 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
