| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1. 综述 | 第10-16页 |
| 1.1 基因表达调控 | 第10-11页 |
| 1.2 终止子概述 | 第11-12页 |
| 1.3 真核生物的3'-UTR | 第12-14页 |
| 1.4 基因沉默 | 第14-15页 |
| 1.5 基因工程常用表达元件的局限性 | 第15-16页 |
| 2. 水稻组成型表达基因的筛选及其终止子的功能分析研究策略 | 第16-17页 |
| 2.1 实验设计 | 第16-17页 |
| 3. 3'-UTR的筛选及克隆 | 第17-23页 |
| 3.1 实验材料 | 第17页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第17页 |
| 3.2 试验方法 | 第17-20页 |
| 3.2.1 提取日本晴水稻RNA及反转录合成cDNA | 第17页 |
| 3.2.2 实时荧光定量realtime-PCR分析 | 第17-19页 |
| 3.2.3 基因组DNA的提取 | 第19页 |
| 3.2.4 候选基因3'-UTR的克隆 | 第19-20页 |
| 3.3 实验结果 | 第20-22页 |
| 3.3.1 应用生物信息学数据库查找筛选候选基因 | 第20-21页 |
| 3.3.2 候选基因表达特征分析 | 第21页 |
| 3.3.3 候选基因3'-UTR的克隆及序列分析 | 第21-22页 |
| 3.4 小结 | 第22-23页 |
| 4. 3'-UTR初步验证 | 第23-33页 |
| 4.1 实验材料 | 第23页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 4.1.2 菌株材料 | 第23页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第23页 |
| 4.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 4.2.1 构建目的片段与GUS融合表达载体 | 第23-24页 |
| 4.2.2 农杆菌介导的烟草瞬时表达 | 第24-26页 |
| 4.2.2.1 烟草的培养 | 第24页 |
| 4.2.2.2 菌液制备及烟草注射 | 第24页 |
| 4.2.2.3 GUS组织化学染色检测 | 第24页 |
| 4.2.2.4 GUS酶活检测 | 第24-26页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第26-32页 |
| 4.3.1 植物表达载体的构建及验证 | 第26-28页 |
| 4.3.2 启动子为35S的重组质粒在烟草中GUS蛋白的表达 | 第28-30页 |
| 4.3.3 启动子为Ubiquitin的重组质粒在烟草中GUS蛋白的表达 | 第30-32页 |
| 4.4 小结 | 第32-33页 |
| 5. 3'-UTR在水稻上的验证 | 第33-43页 |
| 5.1 实验材料 | 第33页 |
| 5.1.1 菌株材料 | 第33页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第33页 |
| 5.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 5.2.1 遗传转化 | 第33页 |
| 5.2.2 转化株的筛选和选择 | 第33页 |
| 5.2.3 转基因植株的分子检测 | 第33-34页 |
| 5.2.3.1 转基因植株的GUS组织染色 | 第33页 |
| 5.2.3.2 转基因植株的GUS酶活检测 | 第33-34页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第34-42页 |
| 5.3.1 水稻转化株根部GUS蛋白酶活性检测 | 第34-36页 |
| 5.3.2 水稻转化株茎部GUS蛋白酶活性检测 | 第36-37页 |
| 5.3.3 水稻转化株叶片组织GUS蛋白酶活性检测 | 第37-39页 |
| 5.3.4 水稻转化株花器官GUS蛋白酶活性检测 | 第39-40页 |
| 5.3.5 水稻转化株种子组织GUS蛋白酶活性检测 | 第40-42页 |
| 5.4 小结 | 第42-43页 |
| 6. 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 附录1. 实验方法 | 第51-56页 |
| 附录2. 3'-UTR序列特征 | 第56-58页 |
| 附录3. 载体构建流程图 | 第58-59页 |
| 附录4. 载体示意图 | 第59-63页 |
| 附录5. 序列比对 | 第63-70页 |
