农杆菌介导抗虫基因PPA的旱稻转化
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 植物转基因技术 | 第10-11页 |
| 1.1.1 植物转基因技术在农业上的应用及发展 | 第10页 |
| 1.1.2 水稻转基因技术 | 第10-11页 |
| 1.2 抗虫转基因旱稻的培育 | 第11-12页 |
| 1.3 植物凝集素 | 第12-13页 |
| 1.3.1 植物凝集素的性质及功能 | 第12页 |
| 1.3.2 植物凝集素的抗虫研究 | 第12-13页 |
| 1.4 有抗虫效果的植物凝集素 | 第13-14页 |
| 1.4.1 雪花莲凝集素(GNA) | 第13页 |
| 1.4.2 半夏凝集素基因 | 第13-14页 |
| 1.5 课题来源 | 第14页 |
| 1.6 研究内容和目的 | 第14-16页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第14-15页 |
| 1.6.2 研究目的 | 第15-16页 |
| 第2章 转基因旱稻植株的获得 | 第16-30页 |
| 2.1 概述 | 第16页 |
| 2.2 实验材料、试剂及设备 | 第16-19页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第17-19页 |
| 2.2.3 实验设备与仪器 | 第19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.3.1 母液的配制 | 第19-21页 |
| 2.3.2 培养基的配制 | 第21-22页 |
| 2.3.3 愈伤组织的诱导及继代 | 第22页 |
| 2.3.4 农杆菌的制备 | 第22页 |
| 2.3.5 农杆菌介导的转化 | 第22-23页 |
| 2.3.6 愈伤组织的脱菌、筛选及分化成苗 | 第23页 |
| 2.3.7 2, 4-D对愈伤组织的诱导率的影响 | 第23页 |
| 2.3.8 数据统计 | 第23页 |
| 2.4 实验结果 | 第23-27页 |
| 2.4.1 愈伤组织的诱导 | 第23-24页 |
| 2.4.2 农杆菌介导转化体系的优化 | 第24-27页 |
| 2.4.3 数据统计结果 | 第27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-28页 |
| 2.6 本章小结 | 第28-30页 |
| 第3章 转基因旱稻的PCR检测 | 第30-36页 |
| 3.1 概述 | 第30页 |
| 3.2 实验材料、试剂及仪器 | 第30-31页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.3.1 主要溶液配制 | 第31-32页 |
| 3.3.2 旱稻DNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.3.3 PCR筛选阳性转基因植株 | 第33-34页 |
| 3.4 实验结果 | 第34-35页 |
| 3.4.1 提取DNA的质量检测 | 第34页 |
| 3.4.2 目的基因PCR反应结果 | 第34页 |
| 3.4.3 测序结果 | 第34-35页 |
| 3.5 讨论 | 第35页 |
| 3.6 本章小结 | 第35-36页 |
| 第4章 转基因旱稻的纯合体筛选 | 第36-42页 |
| 4.1 概述 | 第36页 |
| 4.2 实验材料、试剂及仪器 | 第36-37页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第36页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第36页 |
| 4.2.3 实验设备 | 第36-37页 |
| 4.3 实验方法 | 第37-38页 |
| 4.3.1 大田除草剂筛选 | 第37页 |
| 4.3.2 水稻培养液的配置 | 第37页 |
| 4.3.3 种子的消毒与培养 | 第37-38页 |
| 4.3.4 除草剂筛选 | 第38页 |
| 4.3.5 T_2代植株DNA的提取 | 第38页 |
| 4.3.6 纯合体转基因植株的PCR鉴定 | 第38页 |
| 4.4 实验结果 | 第38-40页 |
| 4.4.1 田间喷洒除草剂实验 | 第38-39页 |
| 4.4.2 实验室除草剂筛选结果 | 第39-40页 |
| 4.4.3 PCR鉴定纯合 | 第40页 |
| 4.5 讨论 | 第40-41页 |
| 4.6 本章小结 | 第41-42页 |
| 第5章 Southern杂交分析 | 第42-54页 |
| 5.1 概述 | 第42页 |
| 5.2 实验材料、试剂及仪器 | 第42-44页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第42页 |
| 5.2.2 主要实验试剂 | 第42-43页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第43页 |
| 5.2.4 溶液的制备 | 第43-44页 |
| 5.3 实验方法 | 第44-48页 |
| 5.3.1 DNA的提取及去RNA操作 | 第44-45页 |
| 5.3.2 模板DNA的纯化回收 | 第45页 |
| 5.3.3 探针的制备 | 第45-46页 |
| 5.3.4 探针标记效率检测 | 第46-47页 |
| 5.3.5 酶切反应 | 第47页 |
| 5.3.6 转膜 | 第47页 |
| 5.3.7 杂交 | 第47-48页 |
| 5.3.8 洗膜 | 第48页 |
| 5.4 实验结果 | 第48-52页 |
| 5.4.1 样品DNA浓度测定 | 第48-49页 |
| 5.4.2 探针模板的纯化及探针标记效率检测 | 第49页 |
| 5.4.3 酶切体系的建立 | 第49-50页 |
| 5.4.4 转膜的影响因素 | 第50-51页 |
| 5.4.5 加入探针的量对杂交结果的影响 | 第51-52页 |
| 5.4.6 旱稻目的基因的Southern检测 | 第52页 |
| 5.5 讨论 | 第52-53页 |
| 5.6 本章小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 攻读硕士期间所发表的论文 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
