| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-15页 |
| 1. 杆状病毒的简介 | 第12页 |
| 2. 杆状病毒BV相关蛋白的研究 | 第12-14页 |
| 2.1 Ac16（Bm8）与BV/ODV-E26 | 第12-13页 |
| 2.2 Ac128（Bm105）与GP64 | 第13页 |
| 2.3 Ac66（Bm54） | 第13页 |
| 2.4 Ac74（Bm60） | 第13页 |
| 2.5 Ac114（Bm94） | 第13页 |
| 2.6 Ac104（Bm88）与VP80 | 第13-14页 |
| 3. 杆状病毒表面展示系统的研究 | 第14-15页 |
| 第二章 研究内容和实验方案设计 | 第15-18页 |
| 1. 研究的主要内容 | 第15-17页 |
| 2. 技术路线 | 第17-18页 |
| 第三章 Bm59基因的生物信息学分析 | 第18-22页 |
| 1. 工具 | 第18页 |
| 2. 生物信息学分析 | 第18-20页 |
| 2.1 Bm59基因序列分析 | 第18页 |
| 2.2 Bm59信号肽分析 | 第18-19页 |
| 2.3 Bm59疏水性分析 | 第19-20页 |
| 2.4 Bm59跨膜结构分析 | 第20页 |
| 2.5 Bm59二级结构分析 | 第20页 |
| 3. 讨论 | 第20-22页 |
| 第四章 重组病毒的构建 | 第22-33页 |
| 1. 材料与试剂 | 第22页 |
| 2. 方法 | 第22-29页 |
| 2.1 构建Bm59ko-Bacmid | 第22-24页 |
| 2.1.1 制备Bm59打靶片段 | 第22-23页 |
| 2.1.2 制备DH10Bac（含pKD46质粒）感受态 | 第23页 |
| 2.1.3 构建Bm59缺失型重组病毒Bm59ko-Bacmid | 第23-24页 |
| 2.1.4 鉴定Bm59缺失型重组病毒Bm59ko-Bacmid | 第24页 |
| 2.2 构建wtBacmid-egfp-polh | 第24-26页 |
| 2.2.1 提取质粒pFastBacDual-polh-egfp | 第24-25页 |
| 2.2.2 制备DH10Bac感受态 | 第25页 |
| 2.2.3 构建wtBacmid-egfp-polh | 第25-26页 |
| 2.2.4 wtBacmid-egfp-polh的鉴定 | 第26页 |
| 2.3 构建Bm59ko-Bacmid-egfp-polh | 第26-27页 |
| 2.3.1 制备Bm59ko-Bacmid感受态 | 第26页 |
| 2.3.2 构建Bm59ko-Bacmid-polh-egfp | 第26页 |
| 2.3.4 Bm59ko-Bacmid-egfp-polh的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4 构建Bm59re-Bacmid-egfp-polh | 第27-29页 |
| 2.4.1 扩增Bm59基因 | 第27页 |
| 2.4.2 双酶切 | 第27-28页 |
| 2.4.3 构建pFastBacDual-polh-egfp-Bm59 | 第28页 |
| 2.4.4 构建Bm59re-Bacmid-egfp-polh | 第28页 |
| 2.4.5 Bm59re-Bacmid-egfp-polh的鉴定 | 第28-29页 |
| 3. 结果 | 第29-32页 |
| 3.1 Bm59ko-Bacmid的鉴定 | 第29页 |
| 3.2 wtBacmid-egfp-polh的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3 Bm59ko-Bacmid-egfp-polh的鉴定 | 第30页 |
| 3.4 转移载体pFastBacDual-polh-egfp-Bm59的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.5 Bm59re-Bacmid-egfp-polh的鉴定 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-33页 |
| 第五章 Bm59缺失对BmNPV病毒增殖和组装的影响 | 第33-38页 |
| 1. 材料与试剂 | 第33页 |
| 2. 方法 | 第33-35页 |
| 2.1 提取病毒基因组 | 第33页 |
| 2.2 转染BmN细胞 | 第33-34页 |
| 2.3 观察荧光情况 | 第34页 |
| 2.4 TCID50法测定病毒滴度 | 第34页 |
| 2.5 透射电镜观察细胞组装情况 | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35-36页 |
| 3.1 荧光显微镜观察病毒增殖情况 | 第35页 |
| 3.2 TCID50法测定病毒增殖情况 | 第35-36页 |
| 3.3 透射电镜观察病毒增殖情况 | 第36页 |
| 4. 讨论 | 第36-38页 |
| 第六章 Bm59缺失对BmNPV病毒复制和转录的影响 | 第38-46页 |
| 1. 材料与试剂 | 第38页 |
| 2. 方法 | 第38-42页 |
| 2.1 Bm59缺失对BmNPV病毒复制的影响 | 第38-40页 |
| 2.1.1 转染BmN细胞 | 第38页 |
| 2.1.2 提取细胞中病毒基因组DNA | 第38-39页 |
| 2.1.3 甲基化酶消化 | 第39页 |
| 2.1.4 设计Q-PCR引物 | 第39页 |
| 2.1.5 绘制标准曲线 | 第39页 |
| 2.1.6 Q-PCR检测病毒基因组的复制水平 | 第39-40页 |
| 2.2 Bm59缺失对BmNPV病毒基因转录的影响 | 第40-42页 |
| 2.2.1 转染BmN细胞 | 第40页 |
| 2.2.2 提取细胞的总RNA | 第40-41页 |
| 2.2.3 逆转录 | 第41页 |
| 2.2.4 设计qRT-PCR引物 | 第41页 |
| 2.2.5 Q-PCR检测Bm59缺失对病毒基因转录水平的影响 | 第41-42页 |
| 2.2.6 数据处理 | 第42页 |
| 3. 结果 | 第42-44页 |
| 3.1 绘制标准曲线 | 第42页 |
| 3.2 Bm59缺失对BmNPV基因组复制的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 Bm59缺失对早期基因lef-3 转录的影响 | 第43页 |
| 3.4 Bm59缺失对晚期基因vp39转录的影响 | 第43-44页 |
| 3.5 Bm59缺失对极晚期基因p10转录的影响 | 第44页 |
| 4. 讨论 | 第44-46页 |
| 第七章 Bm59蛋白表达时相的研究 | 第46-54页 |
| 1. 材料与试剂 | 第46页 |
| 2. 方法 | 第46-50页 |
| 2.1 表达载体pET-28a-Bm59的构建 | 第46-47页 |
| 2.1.1 PCR扩增Bm59基因 | 第46-47页 |
| 2.1.2 构建表达载体pET-28a-Bm59 | 第47页 |
| 2.1.3 转化 | 第47页 |
| 2.2 Bm59蛋白的表达与纯化 | 第47-49页 |
| 2.2.1 诱导表达Bm59蛋白 | 第47页 |
| 2.2.2 大量表达Bm59蛋白 | 第47-48页 |
| 2.2.3 纯化蛋白 | 第48页 |
| 2.2.4 BCA法定量蛋白 | 第48-49页 |
| 2.3 制备多克隆抗体 | 第49-50页 |
| 2.3.1 免疫新西兰大白兔 | 第49页 |
| 2.3.2 制备多克隆抗血清 | 第49页 |
| 2.3.3 抗体效价测定（ELISA法） | 第49-50页 |
| 2.4 Western Blot鉴定Bm59的表达时相 | 第50页 |
| 3. 结果 | 第50-52页 |
| 3.1 表达载体pET-28a-Bm59的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2 Bm59蛋白诱导表达 | 第51-52页 |
| 3.3 BCA法测定蛋白浓度 | 第52页 |
| 3.4 Western Blot鉴定Bm59的表达时相 | 第52页 |
| 4. 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 攻读学位期间成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
