| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1 糖尿病的现状 | 第14-15页 |
| 2 鲨肝活性肽的研究现状 | 第15-16页 |
| 3 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第16-20页 |
| 3.1 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的发现和作用机理 | 第16-18页 |
| 3.2 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统优势 | 第18-19页 |
| 3.3 Bac-to-Bac策略在家蚕杆状病毒表达系统中的应用 | 第19-20页 |
| 4 口服蛋白类药物的研究进展 | 第20-22页 |
| 4.1 口服蛋白类药物的问题 | 第21-22页 |
| 4.2 口服蛋白类药物的策略 | 第22页 |
| 5 小结 | 第22-23页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第23-27页 |
| 1 实验目的和意义 | 第23-25页 |
| 1.1 实验研究的目的 | 第23页 |
| 1.2 实验研究的意义 | 第23-25页 |
| 2 研究内容 | 第25-26页 |
| 3 实验流程图 | 第26-27页 |
| 第三章 APSL基因的生物信息学分析 | 第27-33页 |
| 1 序列与工具 | 第27页 |
| 1.1 序列 | 第27页 |
| 1.2 工具和软件 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-28页 |
| 2.1 APSL基因的获得 | 第27页 |
| 2.2 APSL基因的序列分析 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-32页 |
| 3.1 APSL基因的序列 | 第28-29页 |
| 3.2 疏水性分析 | 第29页 |
| 3.3 跨膜区和信号肽分析 | 第29-30页 |
| 3.4 二级结构的预测 | 第30-31页 |
| 3.5 功能位点分析 | 第31页 |
| 3.6 APSL氨基酸序列同源性分析 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 APSL基因的原核表达 | 第33-48页 |
| 1 材料与试剂 | 第33-37页 |
| 1.1 菌种 | 第33页 |
| 1.2 试剂 | 第33页 |
| 1.3 主要试剂的配置 | 第33-37页 |
| 2 方法 | 第37-44页 |
| 2.1 pET-28a(+)-APSL重组质粒的构建 | 第37-42页 |
| 2.2 APSL重组蛋白的表达 | 第42-44页 |
| 3 结果 | 第44-46页 |
| 3.1 重组质粒pET-28a(+)-APSL的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2 序列测定 | 第45页 |
| 3.3 BL21-pET-28a(+)-APSL的诱导表达及表达形式的确定 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 重组蛋白的纯化及多克隆抗体制备 | 第48-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第48-51页 |
| 1.1 材料 | 第48页 |
| 1.2 试剂 | 第48页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第48-51页 |
| 2 方法 | 第51-57页 |
| 2.1 重组蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 2.2 多克隆抗体制备 | 第52-57页 |
| 3 结果 | 第57-59页 |
| 3.1 表达产物的纯化 | 第57-58页 |
| 3.2 融合蛋白的Western blotting检测 | 第58-59页 |
| 3.3 多抗的效价检测 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第六章 APSL基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 | 第61-84页 |
| 1 材料与试剂 | 第61-63页 |
| 1.1 材料 | 第61页 |
| 1.2 试剂 | 第61页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第61-63页 |
| 2 方法 | 第63-75页 |
| 2.1 重组质粒pFastBac HTA-APSL的构建 | 第63-66页 |
| 2.2 重组基因组rBacmid-APSL的构建 | 第66-68页 |
| 2.3 细胞培养与冻存、复苏 | 第68-69页 |
| 2.4 重组病毒rBv-APSL的获得及鉴定 | 第69-70页 |
| 2.5 目的蛋白rAPSL在家蚕BmN细胞中的表达和鉴定 | 第70-73页 |
| 2.6 重组蛋白rAPSL在家蚕五龄幼虫中的表达和鉴定 | 第73-75页 |
| 3 结果 | 第75-82页 |
| 3.1 重组质粒pFastBac HTA-APSL的筛选和鉴定 | 第75页 |
| 3.2 重组Bacmid的PCR鉴定 | 第75-76页 |
| 3.3 重组Bacmid转染家蚕细胞 | 第76-77页 |
| 3.4 重组杆状病毒的扩增 | 第77-78页 |
| 3.5 重组病毒rBv-APSL的PCR鉴定 | 第78-79页 |
| 3.6 序列测定 | 第79页 |
| 3.7 重组病毒rBv-APSL转录水平的鉴定 | 第79-80页 |
| 3.8 rAPSL蛋白在家蚕细胞中表达及Western blotting鉴定 | 第80页 |
| 3.9 重组病毒接种家蚕五龄幼虫 | 第80-81页 |
| 3.10 感染重组病毒家蚕血淋巴总DNA的PCR鉴定 | 第81-82页 |
| 3.11 rAPSL蛋白在家蚕幼虫中的表达及Western blotting鉴定 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| 第七章 rAPSL蛋白的口服吸收效果 | 第84-88页 |
| 1 材料和试剂 | 第84页 |
| 1.1 材料 | 第84页 |
| 1.2 主要试剂的配制 | 第84页 |
| 2 方法 | 第84-85页 |
| 2.1 rAPSL蛋白的口服剂型的制备 | 第84-85页 |
| 2.2 ICR小鼠的口服给药实验 | 第85页 |
| 2.3 ELISA定性分析ICR小鼠的口服吸收效果 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-87页 |
| 4 讨论 | 第87-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
