美伐他汀生物合成基因mlcF的克隆表达及功能分析
| 缩略语 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 他汀类药物概况 | 第13-16页 |
| 1.1.1 他汀类药物基本结构和分类 | 第14-16页 |
| 1.2 他汀类药物作用机理 | 第16-20页 |
| 1.2.1 他汀类药物降脂机理 | 第16-18页 |
| 1.2.2 他汀类药物的非降脂作用 | 第18-20页 |
| 1.3 美伐他汀的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.3.1 美伐他汀的基本结构 | 第20页 |
| 1.3.2 微生物转化美伐他汀为普伐他汀 | 第20-21页 |
| 1.3.3 美伐他汀的生物合成 | 第21-22页 |
| 1.3.4 美伐他汀的生物合成基因特征描述 | 第22-25页 |
| 1.4 生物信息学对于研究未知基因功能的意义 | 第25-26页 |
| 第2章 绪论 | 第26-27页 |
| 第3章 材料与方法 | 第27-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第27页 |
| 3.1.2 主要试剂与酶类 | 第27页 |
| 3.1.3 培养基 | 第27页 |
| 3.1.4 常用溶液 | 第27-28页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 3.1.6 引物合成与序列测定 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 3.2.1 菌体总RNA的提取与鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.2 目的基因的获得 | 第30-31页 |
| 3.2.3 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第31-32页 |
| 3.2.4 载体制备 | 第32页 |
| 3.2.5 酶切、连接及转化 | 第32-34页 |
| 3.2.6 酶切鉴定重组质粒 | 第34页 |
| 3.2.7 表达重组菌的构建 | 第34页 |
| 3.2.8 重组菌在LB中的生长曲线 | 第34页 |
| 3.2.9 目的基因的表达和SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| 3.2.10 包涵体的纯化及复性 | 第34-35页 |
| 3.2.11 重组蛋白蛋白含量测定 | 第35-36页 |
| 3.3 生物信息学分析 | 第36-38页 |
| 3.3.1 mlcF核酸序列分析 | 第36页 |
| 3.3.2 MlcF蛋白的一级结构分析 | 第36页 |
| 3.3.3 MlcF蛋白的二级结构研究 | 第36页 |
| 3.3.4 MlcF的同源建模 | 第36-38页 |
| 第4章 实验结果 | 第38-53页 |
| 4.1 RT-PCR方法获得mlcF编码序列 | 第38页 |
| 4.2 目的基因测序结果 | 第38-39页 |
| 4.3 重组表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 4.4 重组质粒及IPTG对宿主菌的影响 | 第40-41页 |
| 4.5 重组蛋白的表达及其表达形式的鉴定 | 第41-43页 |
| 4.6 重组蛋白的纯化及其工艺研究 | 第43-45页 |
| 4.7 MlcF的一级结构分析 | 第45-50页 |
| 4.7.1 MlcF的序列同源性分析 | 第45-48页 |
| 4.7.2 MlcF的功能位点分析 | 第48页 |
| 4.7.3 MlcF信号肽预测 | 第48-49页 |
| 4.7.4 跨膜蛋白分析 | 第49-50页 |
| 4.8 MlcF二级结构分析 | 第50-52页 |
| 4.8.1 MlcF二级结构预测 | 第50-51页 |
| 4.8.2 MlcF的圆二光色谱分析 | 第51-52页 |
| 4.9 MlcF三级结构同源建模 | 第52-53页 |
| 第5章 分析与展望 | 第53-57页 |
| 5.1 MlcF蛋白表达与纯化 | 第53-55页 |
| 5.1.1 表达条件 | 第53页 |
| 5.1.2 表达形式 | 第53页 |
| 5.1.3 MlcF蛋白包涵体处理及纯化 | 第53-55页 |
| 5.1.4 圆二光色谱结果分析 | 第55页 |
| 5.2 生物信息学分析 | 第55页 |
| 5.3 展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
