| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 第一部分 绿色荧光蛋白(GFP)基因标记人类视网膜母细胞瘤(RB)细胞裸鼠眼内前房移植瘤模型的建立 | 第15-23页 |
| 摘要 | 第15页 |
| 引言 | 第15页 |
| 材料和方法 | 第15-19页 |
| 材料 | 第15-18页 |
| 1.实验动物 | 第15页 |
| 2.细胞培养用材料 | 第15-16页 |
| 3.主要试剂配制 | 第16页 |
| 4.HE染色化学试剂 | 第16页 |
| 5.其他试剂及材料 | 第16-17页 |
| 6.主要器材与设备 | 第17-18页 |
| 实验方法 | 第18-19页 |
| 1.移植用细胞悬液的制备 | 第18页 |
| 2.实验动物眼内前房注射 | 第18页 |
| 3.裸鼠眼内前房RB移植瘤模型的活体观察 | 第18页 |
| 4.常规病理切片HE染色 | 第18-19页 |
| 结果 | 第19-21页 |
| 1.Rb-GFP细胞在前房内生长的动态观察 | 第19-20页 |
| 2.常规病理 | 第20-21页 |
| 讨论 | 第21-23页 |
| 第二部分 重组腺病毒E2F-siRNA对视网膜母细胞瘤前房移植肿瘤的生长抑制作用 | 第23-35页 |
| 摘要 | 第23-24页 |
| ABSTRACT | 第24-25页 |
| 材料和方法 | 第25-31页 |
| 材料 | 第25-27页 |
| 1.病毒及实验动物 | 第25页 |
| 2.细胞培养用材料 | 第25页 |
| 3.主要试剂配制 | 第25-26页 |
| 4.HE染色及免疫组织化学试剂 | 第26页 |
| 5.其他试剂及材料 | 第26页 |
| 6.主要器材与设备 | 第26-27页 |
| 实验方法 | 第27-31页 |
| 1.通过构建载体的方式合成siRNA | 第27-28页 |
| 2.检测所构建的载体对靶基因转录水平的影响 | 第28-29页 |
| 3.检测针对hE2F1的siRNA对肿瘤细胞的细胞周期影响 | 第29页 |
| 4.筛选出的hE2F1的siRNA序列合成 | 第29页 |
| 5.筛选出的hE2F1 siRNA构建腺病毒载体 | 第29页 |
| 6.Rb肿瘤裸鼠前房模型的建立 | 第29-30页 |
| 7.荧光体视显微镜下连续观察E2F1siRNA对Rb肿瘤生长的影响 | 第30页 |
| 8.组织标本取材 | 第30页 |
| 9.常规病理及细胞凋亡检测 | 第30-31页 |
| 结果 | 第31-33页 |
| 1.瞬时转染Rb肿瘤细胞48小时后Realtime RT-PCR检测E2F1表达情况以筛选能明显抑制靶基因转录的序列 | 第31页 |
| 2.瞬时转染Rb肿瘤细胞48小时后PI(碘化丙酊)染色检测细胞周期各时相细胞数量及DNA含量 | 第31-32页 |
| 3.荧光体视显微镜连续观察裸鼠眼内前房Rb肿瘤细胞的生长情况 | 第32页 |
| 4.常规病理及细胞凋亡的检测 | 第32-33页 |
| 讨论 | 第33-35页 |
| 第三部分 16株肿瘤及正常细胞P53基因状态的检测 | 第35-53页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| 引言 | 第36-37页 |
| 材料和方法 | 第37-46页 |
| 材料 | 第37-41页 |
| 1.细胞株 | 第37页 |
| 2.仪器设备 | 第37-38页 |
| 3.材料及试剂盒 | 第38页 |
| 4.实验试剂 | 第38-40页 |
| 5.计算机分析软件 | 第40页 |
| 6.引物 | 第40-41页 |
| 方法 | 第41-46页 |
| 1.16株肿瘤及正常细胞P53基因热变区5-8外显子的PCR扩增 | 第41-43页 |
| 2.16株肿瘤及正常细胞P53基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 3.16株肿瘤及正常细胞P53基因热变区5-8外显子的PCR产物纯化 | 第43-44页 |
| 4.16株肿瘤及正常细胞P53基因热变区5-8外显子的PCR产物琼脂糖凝胶电泳定量 | 第44页 |
| 5.琼脂糖凝胶电泳及切胶加收载体片段 | 第44-45页 |
| 6.Western blotting检测肿瘤细胞P53基因表达 | 第45-46页 |
| 7.16株肿瘤及正常细胞P53基因的DNA测序 | 第46页 |
| 结果 | 第46-51页 |
| 1.16株肿瘤及正常细胞P53基因热变区5-8外显子的PCR扩增结果 | 第46-47页 |
| 2.16株肿瘤及正常细胞P53基因的DNA变异情况 | 第47-50页 |
| 3.16株肿瘤及正常细胞P53蛋白的表达情况 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 综述 | 第53-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
