| 第一部分 KLF9对PGC1A表达的调控以及在糖异生中的作用 | 第1-43页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-9页 |
| 材料和方法 | 第9-35页 |
| 1 实验材料 | 第9-18页 |
| ·动物 | 第9页 |
| ·菌株 | 第9页 |
| ·质粒载体 | 第9-13页 |
| ·细胞株 | 第13页 |
| ·实验用工具酶以及DNA,蛋白marker | 第13-14页 |
| ·试剂盒 | 第14页 |
| ·主要化学试剂(按试剂公司分类) | 第14-15页 |
| ·主要仪器及设备 | 第15页 |
| ·分析软件 | 第15页 |
| ·实验所用引物 | 第15-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-34页 |
| ·质粒载体的构建 | 第18-22页 |
| ·PCR法扩增目的片段 | 第18-19页 |
| ·PCR点突变KLF-9在PGC1α启动子上的结合位点 | 第19页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| ·DNA及载体的酶切 | 第19-20页 |
| ·片段与载体的连接 | 第20页 |
| ·连接产物的转化 | 第20-21页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第21页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第21-22页 |
| ·细胞培养实验 | 第22-25页 |
| ·细胞的培养条件 | 第22页 |
| ·细胞的复苏,传代培养与冻存 | 第22页 |
| ·细胞计数与存活测试 | 第22-23页 |
| ·肝原代细胞的分离以及培养 | 第23-24页 |
| ·3T3-L1细胞的培养及诱导分化 | 第24-25页 |
| ·转染实验 | 第25页 |
| ·重组腺病毒的构建与包装 | 第25-26页 |
| ·腺病毒感染细胞 | 第26-27页 |
| ·染色体免疫共沉淀实验 | 第27-28页 |
| ·DNA、RNA提取及cDNA的合成 | 第28-30页 |
| ·总RNA的提取 | 第28页 |
| ·总DNA和蛋白质的分离提取 | 第28-29页 |
| ·总RNA逆转录合成cDNA | 第29-30页 |
| ·WESTERN BLOT | 第30-32页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE电泳步骤 | 第30-31页 |
| ·转膜 | 第31页 |
| ·Western印迹杂交 | 第31-32页 |
| ·Real-Time PCR实验 | 第32-33页 |
| ·dual luciferase reporter assay system实验 | 第33页 |
| ·小鼠血糖测定 | 第33页 |
| ·GTT,ITT实验 | 第33-34页 |
| 3 实验流程 | 第34-35页 |
| 实验结果 | 第35-40页 |
| 1. KLF9和PGC1A基因表达被饥饿诱导 | 第35-36页 |
| 2. KLF9调控PGC1A转录是通过结合在PGC1A启动子上实现 | 第36-37页 |
| 3. KLF9和PGC1A在体内的相互作用 | 第37页 |
| 4. 干扰KLF9表达对糖异生调控基因表达的影响 | 第37-38页 |
| 5. 干扰KLF9表达降低肝原代细胞的葡萄糖输出 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-42页 |
| 小结 | 第42-43页 |
| 第二部分 PGC1A与PPARF共激活CIDEC的表达 | 第43-53页 |
| 摘要 | 第43-44页 |
| ABSTRACT | 第44-45页 |
| 前言 | 第45-46页 |
| 材料与方法见第一部分 | 第46页 |
| 实验结果 | 第46-50页 |
| 1. PPARΓ与PGC1A直接结合于CIDEC的启动子而调控转录 | 第46-47页 |
| 2. PPARΓ特异激动剂PIOGLITAZONE可促进CIDEC MRNA的转录 | 第47页 |
| 3. CIDEC过表达的3T3-L1细胞中对脂肪合成以及能量代谢相关基因的影响 | 第47-48页 |
| 4. 在肝脏细胞中过表达CIDEC基因明显增加细胞质脂滴的体积 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 综述 | 第60-69页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70-71页 |
