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基于核酸适配体传感器的蜂蜜中四环素残留快速检测方法研究

学位论文数据集第4-5页
摘要第5-8页
Abstract第8-12页
符号和缩略词说明第25-27页
第一章 绪论第27-39页
    1.1 食品安全快速检测技术的重要性第27页
    1.2 食品中的四环素残留检测第27-30页
        1.2.1 四环素残留及限量标准第27-29页
        1.2.2 食品中四环素残留的检测方法现状及迫切需求第29-30页
    1.3 核酸适配体第30-34页
        1.3.1 核酸适配体概述第30-32页
        1.3.2 核酸适配体的优势第32页
        1.3.3 核酸适配体的应用第32-33页
        1.3.4 利用核酸适配体检测四环素残留的可行性第33-34页
    1.4 生物传感器第34-36页
        1.4.1 生物传感器简介第34页
        1.4.2 生物传感器的应用第34-35页
        1.4.3 构建核酸适配体传感器的可行性第35-36页
    1.5 本文主要研究内容第36-37页
    1.6 研究意义第37-39页
第二章 酶联核酸适配体传感器用于高通量快速检测第39-75页
    2.1 引言第39-40页
    2.2 实验部分第40-51页
        2.2.1 试剂与仪器第40页
        2.2.2 溶液配制第40-41页
        2.2.3 间接竞争酶联核酸适配体传感器(ic-ELAA-aptasensor)第41-47页
            2.2.3.1 方法原理第41-42页
            2.2.3.2 操作流程第42-43页
            2.2.3.3 四环素-牛血清蛋白的包被缓冲液优化第43-44页
            2.2.3.4 Apt76的工作缓冲液优化第44页
            2.2.3.5 封闭剂的优化第44页
            2.2.3.6 SA-HRP的浓度优化第44-45页
            2.2.3.7 缓冲液中竞争曲线的获得第45页
            2.2.3.8 蜂蜜样品的前处理第45-46页
            2.2.3.9 蜂蜜基质中的竞争曲线第46页
            2.2.3.10 加标回收率研究第46页
            2.2.3.11 方法特异性研究第46-47页
        2.2.4 直接竞争酶联核酸适配体传感器(dc-ELAA-aptasensor)第47-51页
            2.2.4.1 方法原理第47页
            2.2.4.2 操作流程第47-48页
            2.2.4.3 链霉亲和素的包被缓冲液优化第48-49页
            2.2.4.4 Apt76的浓度优化第49页
            2.2.4.5 封闭剂优化第49页
            2.2.4.6 四环素-X-辣根过氧化物酶的浓度优化第49-50页
            2.2.4.7 Apt76前处理条件优化第50页
            2.2.4.8 缓冲液中竞争曲线的获得第50页
            2.2.4.9 蜂蜜样品的前处理第50页
            2.2.4.10 蜂蜜基质中的竞争曲线第50-51页
            2.2.4.11 加标回收率研究第51页
            2.2.4.12 方法特异性研究第51页
    2.3 结果与讨论第51-73页
        2.3.1 间接竞争酶联核酸适配体传感器(ic-ELAA-aptasensor)第51-60页
            2.3.1.1 四环素-牛血清蛋白的包被缓冲液优化第51-52页
            2.3.1.2 Apt76的工作缓冲液优化第52-53页
            2.3.1.3 封闭剂优化第53-54页
            2.3.1.4 SA-HRP的浓度优化第54-55页
            2.3.1.5 缓冲溶液中竞争曲线的获得第55-58页
            2.3.1.6 蜂蜜基质中的竞争曲线第58-59页
            2.3.1.7 加标回收率研究第59-60页
            2.3.1.8 方法特异性研究第60页
        2.3.2 直接竞争酶联核酸适配体传感器(dc-ELAA-aptasensor)第60-70页
            2.3.2.1 链霉亲和素的包被缓冲液优化第61-62页
            2.3.2.2 Apt76浓度优化及封闭剂优化第62页
            2.3.2.3 四环素-X-辣根过氧化物酶稀释度优化第62-64页
            2.3.2.4 Apt76前处理方式优化第64页
            2.3.2.5 缓冲液中竞争曲线的获得第64-68页
            2.3.2.6 蜂蜜基质中的竞争曲线第68-69页
            2.3.2.7 加标回收率研究第69-70页
            2.3.2.8 方法特异性研究第70页
        2.3.3 ELISA对ELAA-aptasensor的分析结果进行确证第70-72页
        2.3.4 两种ELAA-aptasensor的比较第72-73页
    2.4 小结第73-75页
第三章 核酸适配体与四环素的本征分子识别研究第75-93页
    3.1 引言第75-76页
    3.2 实验部分第76-79页
        3.2.1 试剂与仪器第76页
        3.2.2 溶液配制第76页
        3.2.3 Apt76和Apt40用于ic-ELAA-aptasensor第76-77页
        3.2.4 Apt76和Apt40用于dc-ELAA-aptasensor第77页
        3.2.5 核酸适配体的折叠结构研究第77-78页
        3.2.6 等温量热滴定法测定核酸适配体与四环素的结合第78-79页
    3.3 结果与讨论第79-90页
        3.3.1 Apt76和Apt40在ic-ELAA-aptasensor中的不同第79-80页
        3.3.2 Apt76和Apt40在dc-ELAA-aptasensor中的不同第80-82页
        3.3.3 核酸适配体的一级结构和二级结构比较第82-83页
        3.3.4 核酸适配体的三级结构及与四环素的分子对接研究第83-89页
        3.3.5 等温量热滴定法测定核酸适配体与四环素的结合第89-90页
        3.3.6 核酸适配体的“体系适用性”第90页
    3.4 小结第90-93页
第四章 纳米金-核酸适配体传感器用于可视化快速检测第93-115页
    4.1 引言第93-94页
    4.2 实验部分第94-99页
        4.2.1 试剂与仪器第94页
        4.2.2 溶液配制第94页
        4.2.3 纳米金颗粒、Apt40及四环素之间相互作用研究第94-95页
        4.2.4 纳米金的制备及表征第95页
        4.2.5 方法原理第95-96页
        4.2.6 四环素的检测第96-97页
        4.2.7 纳米金溶液体积比例优化第97页
        4.2.8 NaCl浓度优化第97页
        4.2.9 Apt40浓度优化第97-98页
        4.2.10 蜂蜜样品的前处理第98页
        4.2.11 缓冲溶液中响应曲线的获得第98页
        4.2.12 实际样品中四环素残留的检测第98-99页
        4.2.13 加标回收率研究和ELISA确证第99页
        4.2.14 方法特异性研究第99页
    4.3 结果与讨论第99-114页
        4.3.1 方法原理验证第99-102页
        4.3.2 纳米金颗粒的表征第102-104页
        4.3.3 核酸适配体的选择第104-105页
        4.3.4 Apt40、四环素及纳米金颗粒三者的相互作用研究第105-106页
        4.3.5 纳米金溶液的体积比例优化第106-107页
        4.3.6 NaCl浓度优化第107-108页
        4.3.7 Apt40浓度优化第108-109页
        4.3.8 缓冲溶液中标准曲线的获得第109-111页
        4.3.9 实际样品中四环素残留的检测第111-112页
        4.3.10 加标回收率研究和ELISA确证第112-113页
        4.3.11 方法特异性研究第113-114页
    4.4 小结第114-115页
第五章 表面等离子共振-核酸适配体传感器用于自动化快速检测第115-129页
    5.1 引言第115-116页
    5.2 实验部分第116-121页
        5.2.1 试剂与仪器第116页
        5.2.2 溶液配制第116页
        5.2.3 方法原理第116-117页
        5.2.4 链霉亲和素在CM5芯片上的固定第117-119页
            5.2.4.1 链霉亲和素的预富集第118页
            5.2.4.2 链霉亲和素在CM5芯片上的共价偶联第118-119页
        5.2.5 Apt76的固定第119-120页
        5.2.6 四环素的检测第120页
        5.2.7 蜂蜜样品中四环素的检测第120页
        5.2.8 加标回收率研究和ELISA确证第120-121页
        5.2.9 方法特异性研究第121页
    5.3 结果与讨论第121-127页
        5.3.1 链霉亲和素的固定第121-122页
            5.3.1.1 链霉亲和素的预富集第121-122页
            5.3.1.2 链霉亲和素的共价偶联第122页
        5.3.2 Apt76的固定第122-123页
        5.3.3 缓冲溶液中四环素的检测第123-125页
        5.3.4 蜂蜜基质中四环素的检测第125-126页
        5.3.5 加标回收率研究和ELISA确证第126页
        5.3.6 方法特异性研究第126-127页
    5.4 小结第127-129页
第六章 电化学-核酸适配体传感用于微量高灵敏快速检测第129-149页
    6.1 引言第129-130页
    6.2 实验部分第130-136页
        6.2.1 试剂与仪器第130页
        6.2.2 溶液配制第130页
        6.2.3 分离胶的制备第130-131页
        6.2.4 方法原理第131-132页
        6.2.5 四环素的检测第132-133页
        6.2.6 电化学工作站参数优化第133-134页
        6.2.7 四面体的制备第134-135页
        6.2.8 核酸适配体浓度的优化第135页
        6.2.9 蜂蜜样品的前处理第135页
        6.2.10 蜂蜜基质中标准曲线的获得第135-136页
        6.2.11 加标回收率研究和ELISA确证第136页
        6.2.12 方法特异性研究第136页
    6.3 结果与讨论第136-148页
        6.3.1 电化学工作站参数优化第136-139页
        6.3.2 单链Apt76的浓度优化第139-140页
        6.3.3 基于单链Apt76的电化学传感器第140-142页
        6.3.4 四面体的制备第142-144页
        6.3.5 四面体的浓度优化第144-145页
        6.3.6 基于四面体的电化学传感器第145-147页
        6.3.7 加标回收率研究和ELISA确证第147页
        6.3.8 方法特异性研究第147-148页
    6.4 小结第148-149页
第七章 全文总结与展望第149-155页
    7.1 全文总结第149-151页
    7.2 本文的创新点第151-152页
    7.3 展望第152-155页
参考文献第155-163页
附录 实验试剂与仪器第163-165页
致谢第165-167页
研究成果及发表的学术论文第167-169页
作者及导师简介第169-171页
附件第171-172页

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