| 学位论文数据集 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 符号和缩略词说明 | 第25-27页 |
| 第一章 绪论 | 第27-39页 |
| 1.1 食品安全快速检测技术的重要性 | 第27页 |
| 1.2 食品中的四环素残留检测 | 第27-30页 |
| 1.2.1 四环素残留及限量标准 | 第27-29页 |
| 1.2.2 食品中四环素残留的检测方法现状及迫切需求 | 第29-30页 |
| 1.3 核酸适配体 | 第30-34页 |
| 1.3.1 核酸适配体概述 | 第30-32页 |
| 1.3.2 核酸适配体的优势 | 第32页 |
| 1.3.3 核酸适配体的应用 | 第32-33页 |
| 1.3.4 利用核酸适配体检测四环素残留的可行性 | 第33-34页 |
| 1.4 生物传感器 | 第34-36页 |
| 1.4.1 生物传感器简介 | 第34页 |
| 1.4.2 生物传感器的应用 | 第34-35页 |
| 1.4.3 构建核酸适配体传感器的可行性 | 第35-36页 |
| 1.5 本文主要研究内容 | 第36-37页 |
| 1.6 研究意义 | 第37-39页 |
| 第二章 酶联核酸适配体传感器用于高通量快速检测 | 第39-75页 |
| 2.1 引言 | 第39-40页 |
| 2.2 实验部分 | 第40-51页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第40页 |
| 2.2.2 溶液配制 | 第40-41页 |
| 2.2.3 间接竞争酶联核酸适配体传感器(ic-ELAA-aptasensor) | 第41-47页 |
| 2.2.3.1 方法原理 | 第41-42页 |
| 2.2.3.2 操作流程 | 第42-43页 |
| 2.2.3.3 四环素-牛血清蛋白的包被缓冲液优化 | 第43-44页 |
| 2.2.3.4 Apt76的工作缓冲液优化 | 第44页 |
| 2.2.3.5 封闭剂的优化 | 第44页 |
| 2.2.3.6 SA-HRP的浓度优化 | 第44-45页 |
| 2.2.3.7 缓冲液中竞争曲线的获得 | 第45页 |
| 2.2.3.8 蜂蜜样品的前处理 | 第45-46页 |
| 2.2.3.9 蜂蜜基质中的竞争曲线 | 第46页 |
| 2.2.3.10 加标回收率研究 | 第46页 |
| 2.2.3.11 方法特异性研究 | 第46-47页 |
| 2.2.4 直接竞争酶联核酸适配体传感器(dc-ELAA-aptasensor) | 第47-51页 |
| 2.2.4.1 方法原理 | 第47页 |
| 2.2.4.2 操作流程 | 第47-48页 |
| 2.2.4.3 链霉亲和素的包被缓冲液优化 | 第48-49页 |
| 2.2.4.4 Apt76的浓度优化 | 第49页 |
| 2.2.4.5 封闭剂优化 | 第49页 |
| 2.2.4.6 四环素-X-辣根过氧化物酶的浓度优化 | 第49-50页 |
| 2.2.4.7 Apt76前处理条件优化 | 第50页 |
| 2.2.4.8 缓冲液中竞争曲线的获得 | 第50页 |
| 2.2.4.9 蜂蜜样品的前处理 | 第50页 |
| 2.2.4.10 蜂蜜基质中的竞争曲线 | 第50-51页 |
| 2.2.4.11 加标回收率研究 | 第51页 |
| 2.2.4.12 方法特异性研究 | 第51页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第51-73页 |
| 2.3.1 间接竞争酶联核酸适配体传感器(ic-ELAA-aptasensor) | 第51-60页 |
| 2.3.1.1 四环素-牛血清蛋白的包被缓冲液优化 | 第51-52页 |
| 2.3.1.2 Apt76的工作缓冲液优化 | 第52-53页 |
| 2.3.1.3 封闭剂优化 | 第53-54页 |
| 2.3.1.4 SA-HRP的浓度优化 | 第54-55页 |
| 2.3.1.5 缓冲溶液中竞争曲线的获得 | 第55-58页 |
| 2.3.1.6 蜂蜜基质中的竞争曲线 | 第58-59页 |
| 2.3.1.7 加标回收率研究 | 第59-60页 |
| 2.3.1.8 方法特异性研究 | 第60页 |
| 2.3.2 直接竞争酶联核酸适配体传感器(dc-ELAA-aptasensor) | 第60-70页 |
| 2.3.2.1 链霉亲和素的包被缓冲液优化 | 第61-62页 |
| 2.3.2.2 Apt76浓度优化及封闭剂优化 | 第62页 |
| 2.3.2.3 四环素-X-辣根过氧化物酶稀释度优化 | 第62-64页 |
| 2.3.2.4 Apt76前处理方式优化 | 第64页 |
| 2.3.2.5 缓冲液中竞争曲线的获得 | 第64-68页 |
| 2.3.2.6 蜂蜜基质中的竞争曲线 | 第68-69页 |
| 2.3.2.7 加标回收率研究 | 第69-70页 |
| 2.3.2.8 方法特异性研究 | 第70页 |
| 2.3.3 ELISA对ELAA-aptasensor的分析结果进行确证 | 第70-72页 |
| 2.3.4 两种ELAA-aptasensor的比较 | 第72-73页 |
| 2.4 小结 | 第73-75页 |
| 第三章 核酸适配体与四环素的本征分子识别研究 | 第75-93页 |
| 3.1 引言 | 第75-76页 |
| 3.2 实验部分 | 第76-79页 |
| 3.2.1 试剂与仪器 | 第76页 |
| 3.2.2 溶液配制 | 第76页 |
| 3.2.3 Apt76和Apt40用于ic-ELAA-aptasensor | 第76-77页 |
| 3.2.4 Apt76和Apt40用于dc-ELAA-aptasensor | 第77页 |
| 3.2.5 核酸适配体的折叠结构研究 | 第77-78页 |
| 3.2.6 等温量热滴定法测定核酸适配体与四环素的结合 | 第78-79页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第79-90页 |
| 3.3.1 Apt76和Apt40在ic-ELAA-aptasensor中的不同 | 第79-80页 |
| 3.3.2 Apt76和Apt40在dc-ELAA-aptasensor中的不同 | 第80-82页 |
| 3.3.3 核酸适配体的一级结构和二级结构比较 | 第82-83页 |
| 3.3.4 核酸适配体的三级结构及与四环素的分子对接研究 | 第83-89页 |
| 3.3.5 等温量热滴定法测定核酸适配体与四环素的结合 | 第89-90页 |
| 3.3.6 核酸适配体的“体系适用性” | 第90页 |
| 3.4 小结 | 第90-93页 |
| 第四章 纳米金-核酸适配体传感器用于可视化快速检测 | 第93-115页 |
| 4.1 引言 | 第93-94页 |
| 4.2 实验部分 | 第94-99页 |
| 4.2.1 试剂与仪器 | 第94页 |
| 4.2.2 溶液配制 | 第94页 |
| 4.2.3 纳米金颗粒、Apt40及四环素之间相互作用研究 | 第94-95页 |
| 4.2.4 纳米金的制备及表征 | 第95页 |
| 4.2.5 方法原理 | 第95-96页 |
| 4.2.6 四环素的检测 | 第96-97页 |
| 4.2.7 纳米金溶液体积比例优化 | 第97页 |
| 4.2.8 NaCl浓度优化 | 第97页 |
| 4.2.9 Apt40浓度优化 | 第97-98页 |
| 4.2.10 蜂蜜样品的前处理 | 第98页 |
| 4.2.11 缓冲溶液中响应曲线的获得 | 第98页 |
| 4.2.12 实际样品中四环素残留的检测 | 第98-99页 |
| 4.2.13 加标回收率研究和ELISA确证 | 第99页 |
| 4.2.14 方法特异性研究 | 第99页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第99-114页 |
| 4.3.1 方法原理验证 | 第99-102页 |
| 4.3.2 纳米金颗粒的表征 | 第102-104页 |
| 4.3.3 核酸适配体的选择 | 第104-105页 |
| 4.3.4 Apt40、四环素及纳米金颗粒三者的相互作用研究 | 第105-106页 |
| 4.3.5 纳米金溶液的体积比例优化 | 第106-107页 |
| 4.3.6 NaCl浓度优化 | 第107-108页 |
| 4.3.7 Apt40浓度优化 | 第108-109页 |
| 4.3.8 缓冲溶液中标准曲线的获得 | 第109-111页 |
| 4.3.9 实际样品中四环素残留的检测 | 第111-112页 |
| 4.3.10 加标回收率研究和ELISA确证 | 第112-113页 |
| 4.3.11 方法特异性研究 | 第113-114页 |
| 4.4 小结 | 第114-115页 |
| 第五章 表面等离子共振-核酸适配体传感器用于自动化快速检测 | 第115-129页 |
| 5.1 引言 | 第115-116页 |
| 5.2 实验部分 | 第116-121页 |
| 5.2.1 试剂与仪器 | 第116页 |
| 5.2.2 溶液配制 | 第116页 |
| 5.2.3 方法原理 | 第116-117页 |
| 5.2.4 链霉亲和素在CM5芯片上的固定 | 第117-119页 |
| 5.2.4.1 链霉亲和素的预富集 | 第118页 |
| 5.2.4.2 链霉亲和素在CM5芯片上的共价偶联 | 第118-119页 |
| 5.2.5 Apt76的固定 | 第119-120页 |
| 5.2.6 四环素的检测 | 第120页 |
| 5.2.7 蜂蜜样品中四环素的检测 | 第120页 |
| 5.2.8 加标回收率研究和ELISA确证 | 第120-121页 |
| 5.2.9 方法特异性研究 | 第121页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第121-127页 |
| 5.3.1 链霉亲和素的固定 | 第121-122页 |
| 5.3.1.1 链霉亲和素的预富集 | 第121-122页 |
| 5.3.1.2 链霉亲和素的共价偶联 | 第122页 |
| 5.3.2 Apt76的固定 | 第122-123页 |
| 5.3.3 缓冲溶液中四环素的检测 | 第123-125页 |
| 5.3.4 蜂蜜基质中四环素的检测 | 第125-126页 |
| 5.3.5 加标回收率研究和ELISA确证 | 第126页 |
| 5.3.6 方法特异性研究 | 第126-127页 |
| 5.4 小结 | 第127-129页 |
| 第六章 电化学-核酸适配体传感用于微量高灵敏快速检测 | 第129-149页 |
| 6.1 引言 | 第129-130页 |
| 6.2 实验部分 | 第130-136页 |
| 6.2.1 试剂与仪器 | 第130页 |
| 6.2.2 溶液配制 | 第130页 |
| 6.2.3 分离胶的制备 | 第130-131页 |
| 6.2.4 方法原理 | 第131-132页 |
| 6.2.5 四环素的检测 | 第132-133页 |
| 6.2.6 电化学工作站参数优化 | 第133-134页 |
| 6.2.7 四面体的制备 | 第134-135页 |
| 6.2.8 核酸适配体浓度的优化 | 第135页 |
| 6.2.9 蜂蜜样品的前处理 | 第135页 |
| 6.2.10 蜂蜜基质中标准曲线的获得 | 第135-136页 |
| 6.2.11 加标回收率研究和ELISA确证 | 第136页 |
| 6.2.12 方法特异性研究 | 第136页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第136-148页 |
| 6.3.1 电化学工作站参数优化 | 第136-139页 |
| 6.3.2 单链Apt76的浓度优化 | 第139-140页 |
| 6.3.3 基于单链Apt76的电化学传感器 | 第140-142页 |
| 6.3.4 四面体的制备 | 第142-144页 |
| 6.3.5 四面体的浓度优化 | 第144-145页 |
| 6.3.6 基于四面体的电化学传感器 | 第145-147页 |
| 6.3.7 加标回收率研究和ELISA确证 | 第147页 |
| 6.3.8 方法特异性研究 | 第147-148页 |
| 6.4 小结 | 第148-149页 |
| 第七章 全文总结与展望 | 第149-155页 |
| 7.1 全文总结 | 第149-151页 |
| 7.2 本文的创新点 | 第151-152页 |
| 7.3 展望 | 第152-155页 |
| 参考文献 | 第155-163页 |
| 附录 实验试剂与仪器 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165-167页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第167-169页 |
| 作者及导师简介 | 第169-171页 |
| 附件 | 第171-172页 |
