| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 螺原体的研究概况 | 第11-16页 |
| ·螺原体的分类地位 | 第11页 |
| ·螺原体的发现与报道 | 第11-14页 |
| ·螺原体的基本生物学特性 | 第14-16页 |
| 2 中华绒螯蟹螺原体的研究进展 | 第16-19页 |
| ·中华绒蝥蟹颤抖病的流行病学调查 | 第16-17页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体的研究进展 | 第17-19页 |
| 3 柔膜体纲螺原体细胞骨架蛋白的研究进展 | 第19-23页 |
| 4 本论文的研究目的、内容、意义和技术路线 | 第23-25页 |
| ·本论文的研究内容如下 | 第23-24页 |
| ·本论文的实验技术路线如下 | 第24-25页 |
| 第二章 螺原体细胞骨架蛋白的生物信息学分析 | 第25-29页 |
| 1 研究方法 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-27页 |
| ·碱基和氨基酸序列相似性 | 第25-26页 |
| ·三级结构 | 第26-27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 螺原体细胞骨架蛋白的荧光定量PCR检测 | 第29-46页 |
| 1 实验材料 | 第29-31页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·实验试剂 | 第29-30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-34页 |
| ·螺原体培养 | 第31页 |
| ·RNA提取 | 第31-32页 |
| ·去除DNA | 第32-33页 |
| ·测量RNA浓度 | 第33页 |
| ·反转录 | 第33页 |
| ·Real Time PCR反应 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-42页 |
| ·中华绒螫蟹螺原体(Spiroplasma eriocheiris)实验结果 | 第34-38页 |
| ·非凡螺原体(Spiroplasma mirum)实验结果 | 第38-42页 |
| 4 讨论 | 第42-46页 |
| 第四章 中华绒蝥蟹螺原体细胞骨架蛋白EF-Tu(延伸因子)的序列分析、克隆、表达及与寄主相互作用关系 | 第46-69页 |
| 1 实验材料 | 第46-50页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·实验试剂 | 第47-50页 |
| ·引物设计与合成 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-60页 |
| ·提取中华绒螯蟹螺原体基因组DNA | 第50-51页 |
| ·EF-Tu基因PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·EF-Tu基因PCR产物沉淀回收 | 第52页 |
| ·构建表达载体pET-28a | 第52-53页 |
| ·连接EF-Tu基因与表达载体pET-28a | 第53-54页 |
| ·pET-EF-Tu连接产物的转化 | 第54页 |
| ·重组蛋白的表达与鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白的质谱分析 | 第56-58页 |
| ·多克隆抗体的制备与效价检测 | 第58-59页 |
| ·Western Blotting分析 | 第59-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-66页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体基因组DNA的提取、EF-Tu基因PCR扩增及序列分析 | 第60-62页 |
| ·构建重组质粒pET-EF-Tu | 第62-63页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组蛋白的质谱分析 | 第64页 |
| ·EF-Tu重组蛋白多克隆抗体的制备与效价检测 | 第64-65页 |
| ·螺原体蛋白Western Blotting分析 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| 全文小结 | 第69-70页 |
| 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 附录:读研期间科研成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
