| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第7-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 贝类免疫系统的概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 免疫识别 | 第12-13页 |
| 1.1.2 免疫效应物 | 第13页 |
| 1.1.3 贝类的组织防御系统 | 第13-14页 |
| 1.2 金属蛋白酶抑制剂（TIMP） | 第14-16页 |
| 1.2.1 TIMP的结构与分类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 脊椎动物的TIMP | 第15页 |
| 1.2.3 无脊椎动物的TIMP | 第15-16页 |
| 1.3 TIMP的功能 | 第16-19页 |
| 1.3.1 TIMPs的抑制活性 | 第16-17页 |
| 1.3.2 促进细胞生长能力 | 第17-18页 |
| 1.3.3 促细胞凋亡功能 | 第18页 |
| 1.3.4 抗血管活性 | 第18-19页 |
| 1.3.5 突触可塑性 | 第19页 |
| 1.4 TIMP的进化史 | 第19页 |
| 1.5 本论文的研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 三角帆蚌TIMP基因的克隆、创伤修复模型的构建及重组TIMP的抑制功能 | 第21-99页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-45页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2.5 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.6 SMART cDNA的合成 | 第24-26页 |
| 2.2.7 TIMP1基因和TIMP2基因的克隆 | 第26-33页 |
| 2.2.8 TIMP1基因和TIMP2基因的生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2.2.9 TIMP1,2 基因在组织中的表达 | 第34-35页 |
| 2.2.10 嗜水气单胞菌、肽聚糖刺激后TIMP1基因和TIMP2基因的表达 | 第35-36页 |
| 2.2.11 三角帆蚌创伤修复过程中TIMP1基因和TIMP2基因的表达 | 第36页 |
| 2.2.12 利用RT- PCR技术检测表达变化 | 第36-38页 |
| 2.2.13 TIMP1基因和TIMP2基因的原核表达 | 第38-45页 |
| 2.2.13.1 重组质粒pET-TIMP1和pET-TIMP2的构建 | 第38-41页 |
| 2.2.13.2 pET-TIMP1和pET-TIMP2在大肠杆菌中的诱导表达 | 第41-42页 |
| 2.2.13.3 重组TIMP1和TIMP2蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.13.4 重组蛋白浓度的测定 | 第43-44页 |
| 2.2.13.5 重组蛋白活性的测定 | 第44-45页 |
| 2.3 实验结果 | 第45-95页 |
| 2.3.1 三角帆蚌的总RNA | 第45-46页 |
| 2.3.2 三角帆蚌TIMP1基因cDNA全长克隆 | 第46页 |
| 2.3.3 TIMP1基因的cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第46-49页 |
| 2.3.4 TIMP2基因的cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第49-50页 |
| 2.3.5 TIMP基因序列的生物信息学分析 | 第50-61页 |
| 2.3.5.1 TIMP1和TIMP2基因的一级结构分析 | 第50-52页 |
| 2.3.5.2 TIMP1和TIMP2基因的蛋白亲水性与疏水性分析 | 第52-54页 |
| 2.3.5.3 TIMP1基因和TIMP2蛋白的结构域分析 | 第54-56页 |
| 2.3.5.4 TIMP1基因和TIMP2蛋白的信号肽预测 | 第56-57页 |
| 2.3.5.5 TIMPs基因的二级结构分析 | 第57-59页 |
| 2.3.5.6 TIMP蛋白的三级结构预测 | 第59-61页 |
| 2.3.6 推导TIMP1氨基酸序列的同源性比较 | 第61-63页 |
| 2.3.7 推导TIMP2氨基酸序列的同源性比较 | 第63-66页 |
| 2.3.8 TIMP1和TIMP2氨基酸序列的同源性比较 | 第66-67页 |
| 2.3.9 TIMP基因的系统进化树 | 第67-69页 |
| 2.3.10 TIMP基因的组织表达 | 第69-88页 |
| 2.3.10.1 TIMP1基因的组织表达 | 第73-74页 |
| 2.3.10.2 TIMP2基因的组织表达 | 第74-75页 |
| 2.3.10.3 肽聚糖和嗜水气单胞菌刺激三角帆蚌后TIMP1基因在血细胞、肝胰脏中的表达分析 | 第75-81页 |
| 2.3.10.4 肽聚糖和嗜水气单胞菌刺激三角帆蚌后TIMP2基因在血细胞、肝胰脏中的表达量变化 | 第81-86页 |
| 2.3.10.5 创面组织TIMP1基因的表达变化 | 第86-87页 |
| 2.3.10.6 创面组织TIMP2基因的表达变化 | 第87-88页 |
| 2.3.11 TIMP1和TIMP2基因的原核表达与纯化 | 第88-92页 |
| 2.3.11.1 TIMP1基因的重组质粒构建及在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第88-90页 |
| 2.3.11.2 TIMP2基因的重组质粒构建及在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第90-92页 |
| 2.3.12 重组TIMP1和TIMP2蛋白浓度和活性的测定 | 第92-95页 |
| 2.3.12.1 重组TIMP1和TIMP2蛋白浓度的测定 | 第92-93页 |
| 2.3.12.2 重组TIMP1和TIMP2蛋白活性的测定 | 第93-95页 |
| 2.4 讨论 | 第95-99页 |
| 第3章 结论与展望 | 第99-101页 |
| 3.1 结论 | 第99-100页 |
| 3.2 进一步工作的方向 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第112页 |
