| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 引言 | 第12页 |
| 1.1 循环肿瘤细胞CTCs检测及肿瘤诊断 | 第12-18页 |
| 1.1.1 循环肿瘤细胞CTCs的定义 | 第12-13页 |
| 1.1.2 循环肿瘤细胞CTCs与肿瘤转移 | 第13-15页 |
| 1.1.3 循环肿瘤细胞CTCs与肿瘤诊断 | 第15-16页 |
| 1.1.4 循环肿瘤细胞CTCs的检测和分离方法 | 第16-18页 |
| 1.2 端粒及端粒酶与肿瘤及衰老的关系 | 第18-22页 |
| 1.2.1 端粒的结构和功能 | 第18-19页 |
| 1.2.2 端粒酶的结构及功能 | 第19页 |
| 1.2.3 端粒酶与肿瘤 | 第19-22页 |
| 1.3 腺病毒 | 第22-24页 |
| 1.3.1 腺病毒的构成 | 第22-23页 |
| 1.3.2 腺病毒的生活史 | 第23-24页 |
| 1.3.3 腺病毒载体 | 第24页 |
| 1.4 FMSA装置介绍 | 第24-29页 |
| 1.5 研究路线及目的意义 | 第29-32页 |
| 第二章 三种包含端粒酶启动子和GFP标签的腺病毒质粒构建及其相关性验证 | 第32-53页 |
| 引言 | 第32页 |
| 2.1 实验材料及设备 | 第32-34页 |
| 2.1.1 细胞 | 第32-33页 |
| 2.1.2 试剂 | 第33页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第33页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第34-35页 |
| 2.2.2Hirt法提取腺病毒DNA具体操作流程 | 第35页 |
| 2.2.3 腺病毒的制备 | 第35页 |
| 2.2.4 腺病毒的纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.5 腺病毒的扩增 | 第36页 |
| 2.2.6 病毒滴度测定（噬斑计数法） | 第36-37页 |
| 2.2.7 含mCherry的逆转录病毒质粒构建 | 第37页 |
| 2.2.8 mCherry标记肿瘤细胞 | 第37-38页 |
| 2.2.9 实时定量PCR | 第38-39页 |
| 2.2.10端粒重复序列扩增（TRAP）法分析细胞端粒酶活性 | 第39-40页 |
| 2.2.11利用Microplate Reader判定荧光表达量 | 第40页 |
| 2.2.12图像分析及数据处理 | 第40页 |
| 2.3 结果分析 | 第40-51页 |
| 2.3.1pAd5G△E3质粒的成功构建 | 第40-42页 |
| 2.3.2 三种带有不同hTERT启动子序列的腺病毒质粒的构建 | 第42-45页 |
| 2.3.3 四种腺病毒滴度的测定 | 第45页 |
| 2.3.4 逆转录病毒感染细胞及其荧光表达检测 | 第45-46页 |
| 2.3.5 最适病毒侵染复数MOI的选择 | 第46-47页 |
| 2.3.6 利用q RT-PCR和TRAP ASSAY检测不同细胞中h TERT的表达量 | 第47-49页 |
| 2.3.7 四种腺病毒侵染细胞后GFP表达量的检测 | 第49-50页 |
| 2.3.8 腺病毒侵染细胞GFP表达量及其hTERT表达水平相关性分析 | 第50-51页 |
| 2.4 结果分析与讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 四种腺病毒体外对细胞特异性侵染的研究 | 第53-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 3.1.1 细胞 | 第53页 |
| 3.1.2 试剂 | 第53页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第53-54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第54页 |
| 3.2.2 细胞计数 | 第54页 |
| 3.2.3 四种腺病毒感染mCherry标记的肿瘤细胞 | 第54页 |
| 3.2.4 血液中白细胞的分离 | 第54页 |
| 3.2.5 腺病毒感染白细胞 | 第54-55页 |
| 3.2.6 腺病毒感染肿瘤细胞 | 第55页 |
| 3.2.7 腺病毒感染白细胞及肿瘤细胞的混合物 | 第55页 |
| 3.2.8 免疫荧光染色 | 第55页 |
| 3.2.9 图像分析及数据处理 | 第55-56页 |
| 3.3 结果分析 | 第56-66页 |
| 3.3.1 荧光显微镜分检测四种腺病毒对正常上皮细胞及肿瘤细胞的侵染能力 | 第56页 |
| 3.3.2 四种腺病毒侵染细胞最佳浓度的筛选 | 第56-60页 |
| 3.3.3 从四种腺病毒中选取最佳腺病毒 | 第60-66页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 FMSA过滤装置与腺病毒相结合侵染血液样本的初步研究 | 第68-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 4.1.1 细胞 | 第68页 |
| 4.1.2 试剂 | 第68-69页 |
| 4.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 4.2.1 FMSA可行性试验 | 第69页 |
| 4.2.2 腺病毒AdTSe感染新鲜血液样本 | 第69页 |
| 4.2.3 图像分析及数据处理 | 第69-70页 |
| 4.3 结果分析 | 第70-74页 |
| 4.3.1 利用肿瘤细胞/血液混合样本验证FMSA+Ad5GTSe循环肿瘤细胞检测法的可行性 | 第70-71页 |
| 4.3.2 利用患者血液样本初步验证FMSA+Ad5GTSe循环肿瘤细胞检测法的可行性 | 第71-74页 |
| 4.4 结果分析与讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 结论，创新点与展望 | 第76-78页 |
| 5.1 结论 | 第76页 |
| 5.2 研究创新点 | 第76页 |
| 5.3 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-90页 |
| 附录 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 个人简介 | 第94页 |
