| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 縮略词索引 | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第17-18页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 抗体 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 携带小鼠JPH2基因shRNA慢病毒载体的的构建 | 第19-24页 |
| 2.2.2 RNAi慢病毒包装与滴度检测 | 第24-27页 |
| 2.3 新生小鼠心肌细胞的培养 | 第27-28页 |
| 2.3.1 取心脏 | 第27页 |
| 2.3.2 酶消化心房肌组织 | 第27页 |
| 2.3.3 心肌组织的铺板、换液 | 第27-28页 |
| 2.4 重组慢病毒转染新生小鼠心肌细胞 | 第28-29页 |
| 2.4.1 JPH2 si RNA慢病毒载体转染心肌细胞 | 第28-29页 |
| 2.4.2 心肌细胞的收集 | 第29页 |
| 2.5 流式细胞术 | 第29-30页 |
| 2.6 qRT-PCR | 第30-34页 |
| 2.6.1 管家基因GAPDH和目的基因JPH2、SK2的引物序列 | 第30页 |
| 2.6.2 总RNA抽提 | 第30-31页 |
| 2.6.3 去除基因组DNA | 第31页 |
| 2.6.4 总RNA纯度和完整性检测 | 第31-32页 |
| 2.6.5 逆转录 | 第32-33页 |
| 2.6.6 荧光定量PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.7 Western-blotting检测转染后各组心肌细胞JPH2蛋白表达水平以及相应的对SK2蛋白表达的影响 | 第34-39页 |
| 2.7.1 新生小鼠心肌细胞总蛋白的提取 | 第34-35页 |
| 2.7.2 BCA法测量提取的心肌细胞的总蛋白含量 | 第35-37页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE电泳 | 第37-39页 |
| 2.8 统计分析 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-49页 |
| 3.1 psiHIV-U6-EGFP shRNA重组慢病毒表达载体的鉴定及包装 | 第40-42页 |
| 3.1.1 JPH2基因siRNA靶区段筛选结果 | 第40页 |
| 3.1.2 psiHIV-U6-EGFP shRNA重组慢病毒载体PCR鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.1.3 阳性克隆测序结果 | 第41页 |
| 3.1.4 重组慢病毒载体psiHIV-U6-shRNA的包装和滴度测定 | 第41-42页 |
| 3.2 新生小鼠心肌细胞成功培养 | 第42-43页 |
| 3.3 慢病毒转染心肌细胞及其效率的检测 | 第43-44页 |
| 3.4 新生小鼠心肌细胞JPH2敲减效应的检测 | 第44-46页 |
| 3.4.1 qRT-PCR检测小鼠心肌细胞JPH2 mRNA表达 | 第44-46页 |
| 3.5 敲减JPH2对小鼠心肌细胞SK2和RyR2表达的影响 | 第46-49页 |
| 3.5.1 qRT-PCR检测各组SK2mRNA和RyR2mRNA表达受JPH2的影响 | 第46-47页 |
| 3.5.2 JPH2siRNA对新生小鼠心肌细胞SK2蛋白表达的影响 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-54页 |
| 4.1 新生小鼠心肌细胞的培养 | 第49-50页 |
| 4.2 siRNA设计原则 | 第50-51页 |
| 4.3 JPH2siRNA的沉默效应 | 第51-53页 |
| 4.4 JPH2干扰对SK2表达的影响 | 第53-54页 |
| 5 存在的问题 | 第54-55页 |
| 6 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 综述 | 第59-66页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历 | 第67页 |
